미생물 실험

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미생물 실험에 대한 보고서 자료입니다.

목차

<미생물 실험>
1. 세균, 대장균군
1) 일반세균
2) 대장균군
2. 효모, 유산균
1) 효모, 곰팡이
2) 유산균
3. 대장균
4. 황색포도상구균
5. 비브리오
1) 장염 Vibrio菌
6. 살모넬라 ( Salmonella菌 )
7. 대장균 O-157
8. B. cereus ( Bacillus cereus菌 )
9. 리스테리아 모노사이토젠스

본문내용

+ 증류수 500ml 용해 후 + 1N 수산화나트륨 175ml 혼합 후 pH 7.2로 조정한다.(pH가 맞지 않을 경우 pH 조절 시약으로 조절한다.)
- pH 조절 후 물의 양을 Check하면 675ml가 측정 되는데, 여기에 증류수를 가하여 1000ml 를 만든 후 121℃에서 20분간 멸균한다. 이것이 멸균인산완충액으로 한다.
- 사용시에는 이 원액을 1ml를 취하여 멸균 증류수 800ml에 가하여 희석하고, 이것을
멸균 인산완충희석액으로한다.
※ Polymyxin B supplement 만드는 법(증류수 1L에 2Vial, 500ml에 1Vial 첨가)
- Polymyxin B 사용 시(멸균증류수) 1000ml에 2ml, 500ml에 1ml를 첨가하여 사용한다.
- Egg Yolk 50%를 1000ml에는 50ml 첨가(머크사 제품 사용시 100ml첨가)
- Egg Yolk 50%를 500ml에는 25ml 첨가(머크사 제품 사용시 50ml첨가)
※ MYP Agar 만드는 법
- (MYP Agar 43g + 증류수 900ml) 21.5g + 증류수 450ml 용해 121℃ 15분간 멸균 후 50℃ 정도로 냉각 후
- 여기에 Polymyxin B + Egg Yolk를 MYP Agar에 투입한 다음 Petri dish에 부어서
굳혀 놓는다. (표면에 수분 없게 한다.)
★ 실험순서
① 멸균인산완충용액에 시료 25g 또는 25ml 넣고 균질화
* 균이 많다고 예상 될 경우 단계별로 희석하여 각각 희석액 0.1ml 씩
② MYP Agar에 0.1ml 넣고 골고루 펴 발라준다(평판도말)
* 스프레더 또는 곤라지봉으로 사용함
③ 30℃에서 24시간 배양
④ 분홍색 집락 주변에 혼탁환을 가지 Colony 선택
* 명확하지 않을때 24시간 더 배양함
(①, ②, ③, ④ 분리배양)
⑤ Nutrient Agar에 재접종하여 30℃, 24시간 배양
⑥ API CHB Kit 또는 BBL Crystal GP Kit를 이용하여 확인
(⑤, ⑥ 확인시험)
9. 리스테리아 모노사이토젠스
♠ 증균배양시 이용
※ Listeria Enrichment Broth 증균배지 제조방법(우유, 유제품, 가공식품 및 수산물 이용)
- Listeria Enrichment Broth 36.1g + 증류수 1L 녹인 후 pH 7.3±0.2 조정한 후
121℃에서 15분간 멸균한다.
※ UVM- Modified Listeria 증균배지 제조 방법(식육 및 가금류 이용)
- UVM- Modified Listeria 52g + 증류수 1L 녹인 후 pH 7.3±0.2 조정한 후
121℃에서 15분간 멸균한다.
※ Fraser Listeria 증균 배지 제조 방법(식육 및 가금육 검체만 2차 증균시 이용)
- Fraser Listeria 55g + 증류수 1L 녹여 121℃에서 15분간 멸균하여 50℃로 식힌 후
Fraser Listeria Supplement를 여과 멸균하여 가한다.
(ex) 배지량400ml+Supplement 4ml
♠ 분리배양시 이용
※ Oxford Agar 분리 배지용 제조법
- Oxford Agar 57.5g + 증류수 1L에 녹여 pH 7.0±0.2로 조정한 후 121℃에서 15분간 멸균한다. 이를 50℃ 정도로 식힌 후 Oxford Antimicrobic Supplement를
여과 멸균하여 가한다.
(ex) 배지량400ml+Supplement 4ml (멸균증류수or멸균증류수5ml+에탄올5ml 2종류 있음)
※ Tryptic Soy 한천 분리 배지용 제조법
- 0.6% yeast extract가 포함 된 Tryptic Soy 분리 배지 g + 증류수 1L에 녹여
pH7.3±0.2로 조정후121℃에서 15분간 멸균한다.
(ex) 100g(Tryptic Soy)×0.006g(0.6% yeast)에 0.6g
★ 실험순서
① Listeria Enrichment Broth (우유, 유제품, 가공식품 및 수산물)
UVM- Modified Listeria (식육 및 가금류)
225ml + 시료 25g or 25ml 후 30℃에서 24시간 배양
(1차 증균배양)
② Fraser Listeris Broth 10ml + 1차 증균배양액 0.1ml
(식육 및 가금류 검체만 2차 증균 실시) 30℃에서 24시간 배양
(2차 증균배양)
(1차 증균배양, 2차 증균배양 => 증균배양)
③ Oxford Agar 또는 Listeria chlorid-Phenylethanol-moxalactam Agar에 백금이로
이식 후 30℃ 에서 24-48시간 배양
(의심집락: 집락주변 검은갈색, 흰색 Colony에 중간 함몰형 집락)
④ 의심 집락이 확인되면 이를 0.6% yeast extract가 첨가한 Tryptic Soy Agar에
이식 30℃에서 24시간 배양, 그람염색 후 그람 양성 간균 확인
(③, ④ 분리배양)
⑤ API Listeria Kit로 확인 실험
(⑤ 확인실험)
▷ 리스테리아모노사이토젠스균의 특징
- 식품으로의 경로: 연성 치즈나 채소 등의 식품, 싱크대 등의 식품 접촉표면, 냉장고 등 거의 모든 곳
- 관련 식품: 연성치즈, 콜슬로, 소시지, 런천미트, 빠떼, 콜드 캇, 델리 타입 육류나 닭고기
- 생육특성: ­1.5~44℃, pH 4.5~9.5, 0℃ 에서 7.5일이면 2배로 증식함
- 살균온도: 70℃에서 2분간, 75℃에서 24초간, 85℃에서 순간적으로 사멸
- 식중독 증상: 열, 오환, 두통을 동반한 몸살증세, 때로는 복통과 설사,
잠복기 12시간~3주정도.
나중에 보다 심각한 증상 유발 가능성(임산부는 태아의 뇌막염과 유산)
- 대책: 냉장온도에서 증식하므로 냉장, 냉동식품에서 많이 검출되고 냉장고와 배수구를 주 기적으로 청소 소독 해주어야만 조리환경에서 제거된다.
※ 증균배양시 리스테리아모노사이토젠스 구별
- 좌측에 있는 시험관 음성
- 우측에 있는 시험관 양성 반응
(색깔: 검은색)
※ 분리배양시 리스테리아모노사이토젠스 구별
- 음성: 황색포도상구균 배지처럼
황색 색깔을 형성하고 있음
- 양성: 집락 주변 검은 갈색
흰색Colony에 중간 함몰형 집락 선별

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미생물 ,   미생물 실험 ,   대장균,   효모 ,   세균,   살모넬라 ,   황색포도상구균,   비브리오