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4. Purpose : 전기영동의 의미를 이해하고 DNA의 크기 및 구조에 따른 결과차이를 이해한다. Agarose gel에 DNA와 loading dye를 넣고 전기를 걸어주면 DNA는 인산기 때문에 매질을 타고 양전하 방향으로 움직이게 된다. 이때 움직이는 속도는 DNA의 크기에
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Agarose-gel 전기영동
실험목적
종류가 다른 DNA 단편을 agarose-gel 전기영동을 통해서 크기를 분석하고, agarose-gel 전기영동 장치의 사용법을 알아본다.
이론 소개
≪ 사 진 ≫
DNA의 정의
≪ 그 림 ≫
DNA의
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Agarose gel electrophoresis ＆ Gel elution
전기영동
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• 용액에 전류를 통했을 때 용액 중의 하전 입자가 양극 또는 음극으로 이동하는 현상
• 주로 단백질 관련 물질 또는 유사한
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agarose의 특징을 알아야 한다는 것이다.!!
agarose는 굳으면 마치 3차원 그물과 같은 구조가 된다고 한다.
농도가 진하면 진할수록 그 구조는 더 tight하게 된다고 한다.
DNA의 사이즈가 크면 ㅡ전하도 많이 갖고 있어서 +쪽으로 빨리 움직일 것 같지
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ommonly used electrophoresis buffers
Buffer
Concentrated stock solution (per liter)
Tris-acetate (TAE)
50x
242 g Tris base
57.1 ml glacial acetic acid
100 ml 0.5 M EDTA (pH 8.0)
Generally used for agarose EP
Tris-borate (TBE)
20x
121.1 g Tris base
61.7 g boric acid
7.44 g Na2EDTA-2H2O
Generally use
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agarose gel은 polyacryamide보다 큰 통로를 가지고 있어 분자량이 큰 DNA를 분리하는데 적합하기 때문에 DNA 크기 측정에 이용된다. DNA 전기영동도 단백질의 전기영동과 마찬가지로 큰DNA가 작은 DNA보다 멀리 이동하지 못한다. 하지만 DNA의 경우 같은
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경우 효소에 의해 다시 잘려, agarose gel로 전기영동 하였을 때 vector와 insert, 이렇게 2 band로 나오는 것을 이용한 것이다.
DNA
10㎕
10×H buffer
2㎕
NdeⅠ
1㎕
XhoⅠ
1㎕
DDW
6㎕
total
20㎕
다시 PCR로 확인해 보았다.
premix에 다음과 같이 넣고 PCR을 했다.
DNA
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