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ommonly used electrophoresis buffers
Buffer
Concentrated stock solution (per liter)
Tris-acetate (TAE)
50x
242 g Tris base
57.1 ml glacial acetic acid
100 ml 0.5 M EDTA (pH 8.0)
Generally used for agarose EP
Tris-borate (TBE)
20x
121.1 g Tris base
61.7 g boric acid
7.44 g Na2EDTA-2H2O
Generally use
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DNA가 관찰되는 원리
- Ethidium bromide의 특성
Ethidium bromide(EtBr)은 DNA염기 사이로 끼어드는 평면구조를 가진다. 유리형의 EtBr은 형광능이 작지만 DNA 염기사이에 결합한 결합형이 되면 유리형의 EtBr보다 형광이 증가하여 관찰이 용이하게 된다. DNA
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DNA가 이동되는 정도나 DNA가 gel에서 분리되는 정도가 달라진다. 따라서 효소 억제제와 nuclease가 함유되어 있지 않으며 ethidium bromide로 염색할 경우 형광의 배경을 극소로 하기 위한 특별히 정제된 agarose를 사용해야한다. 전기영동 tank와 gel은 동
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DNA 조각의 이동속도에 크게 영향을 주기 때문이다.
* Gel에 『ethidium bromide(Etbr)』가 함유되어 있으면 전기영동 하는 동안 어느 시기에나 자외선 하에서 관찰이 가능하다. 그러나, gel에 ethidium bromide를 함유시키지 않고 전기영동한 후 gel을 ethidiu
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조각을 감지하기가 어렵게 된다. 이렇게 되는 경우에는 gel을 ethidium bromide가 0.5 μg/ml 포함된 증류수나 1x TAE 용액에 30∼45분간 담가 염색하였다가 관찰하면 된다.
- 파장 254 nm에서의 자외선 : DNA에 흡수되어 색소에 전달
- Ethidium bromide는 단일가
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