|
Agarose-gel 전기영동
실험목적
종류가 다른 DNA 단편을 agarose-gel 전기영동을 통해서 크기를 분석하고, agarose-gel 전기영동 장치의 사용법을 알아본다.
이론 소개
≪ 사 진 ≫
DNA의 정의
≪ 그 림 ≫
DNA의
|
|
|
gel의 polymerization 과정을 설명하라.
1R-4. 0.8%의 Agarose gel을 사용하여 크기는 같지만 여러 가지 다른 형태의 DNA를 분석하려고 한다. DNA가 circular covalently closed(Supercoil)형태, Open circular형태, Linear형태로 되어있을 때 예상되는 전기영동 거리를 설명
|
|
|
나름대로 분석해 보세요.
참고로 아래 사진은 겨우살이 sample로 선명한 밴드를 볼 수 있습니다. 1. Metrial
2. Method
1) Agarose gel 만들기
2) Agarose gel 전기영동시 DNA의 이동에 영향을 주는 요인들
3. DNA loading dye
4. 전기영동 buffer
5. Result
|
|
|
Agarose TAE - Agarose 2g, TAE 200㎖, 전자레인지, 저울
1Ⅹ TAE Buffer
EtBr, 용기, 알루미늄 박, shaking할 때 쓰는 기계, DNA gel, DW, DNA gel,
* 전기영동기계 - 보충
* Gel extract
사진촬영기기,e-tube, 2㎖ collection tube, Rack,
Voltex, Centrifuge, 1.5㎖ Microcentrifuge tube, MinElu
|
|
|
마이크로 피펫을 사용하여 겔로 loading한다. (각 샘플loading 시 새로운 팁으로 교체하며 피펫이 gel을 뚫지 않도록 빠르고 정확하게 넣는다)
3. DNA시료를 넣어준 comb 쪽은 (-)전극, 반대편은 (+)전극으로 전압을 걸어 30~40분간 100V로 전기영동을 시작
|
|
 |
전기영동 이동거리로 분석한 결과와 일치한다.
agarose gel은 polyacryamide보다 큰 통로를 가지고 있어 분자량이 큰 DNA를 분리하는데 적합하기 때문에 DNA 크기 측정에 이용된다. DNA 전기영동도 단백질의 전기영동과 마찬가지로 큰DNA가 작은 DNA보다
|
|
|
경우 효소에 의해 다시 잘려, agarose gel로 전기영동 하였을 때 vector와 insert, 이렇게 2 band로 나오는 것을 이용한 것이다.
DNA
10㎕
10×H buffer
2㎕
NdeⅠ
1㎕
XhoⅠ
1㎕
DDW
6㎕
total
20㎕
다시 PCR로 확인해 보았다.
premix에 다음과 같이 넣고 PCR을 했다.
DNA
|
|
|
전기영동 결과를 통해 알 수 있었다. 한 개의 종자(4번)만이 대립되는 두 allele을 갖지 못하여, 1개의 밴드만 나타냈기에, 따라서 자식 오염주는 4번이다.
또한 멜론 샘플들의 순도는 80%임을 알 수 있었고, 멜론 종자의 순도검정시 DNA mar
ker를 이
|
|
|
DNA의 ratio를 잘 맞추는 것이 중요하다. 무조건 1:1이 아니라 길이, molar 농도를 참고 해서 맞춰야 한다. ligation이 잘 되었는지 확인하기 위해서는 cloning 까지 마쳐야 한다. cloning이 금방 끝나는 것이 아니라 오래 걸린다. 또, 제대로 colony가 뜨지
|
|
메뉴펼치기
