식물조직배양, 배지의 성분 및 제조에 대하여

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식물조직배양, 배지의 성분 및 제조에 대하여에 대한 보고서 자료입니다.

본문내용

2PO4 . H2O
150
Stock Ⅰ
mg/100ml
MnSO4 . 7H2O
10
1000
ZnSO4 . 7H2O
2
200
H3BO3
3
300
KI
0.75
75
Na2
MoO4 . 2H2O
0.25
25
CuSO4 . 5H2O
0.025
2.5
CoCl2 . 6H2O
0.025
2.5
Stock Ⅱ
(X1000)
mg/100ml
Nicotinic acid
1.0
100
Pyridoxine hydrochloride
1.0
100
Thiamine hydrochloride
10.0
1000
Stock Ⅲ
(X200)
15000/500ml
CaCl2 . 2H2O
150
Others
Myo-Inositol
100
Fe-EDTA
58
Glutamine
800
L-Serine
100
Sucrose
10(%)
Agar
0.8(%)
0.1 mg/l 2,4-D and 0.1 mg/l BAP PH 5.8
* Na2MoO4ㅗ2H2O, H3BO3를 각각 먼저 녹인 후 기타성분을 녹인다.
다음은 Stock solution을 사용하여 배지 1ℓ를 만드는 과정 중 한 가지 과정만을 설명한 것이다. 이 방법 외에도 여러 가지 방법이 있다.
① 1ℓ 용량의 용기에 500㎖의 증류수를 채운 후 각각의 stock solution을 pipette으로 넣는다.
② Myoinositol, sucrose를 넣는다.(myoinositol은 stok solution에 첨가하여 만들 수도 있다.).
③ 증류수를 첨가하여 950㎖정도 되게 한다.
④ pH를 NaOH(또는 KOH)나 HCl로 5.8되게 조정한다.
⑤ 증류수를 첨가하여 총용량을 1ℓ로 조정한다.
⑥ 배지를 2ℓ 이상의 flask나 유리제품의 냄비 등에 옮기고 한천을 첨가한다(일반적으로 한천은 0.8%를 사용).
⑦ 다음의 각각의 방법을 선택적으로 이용할 수 있다.
-Flask 등을 aluminium foil로 막고 120℃(1.06Kg/㎠)에서 15분간 고압살균
-Hot plate & magnetic stirrer 위에 배지가 들어 있는 flask 등을 올려놓고 한천이 녹을 때 까지 가열한다.
⑧ 배지가 뜨거운 상태에서 배양용기에 일정량씩 분주하여 고압증기 살균하거나, 대량으로 고압 증기 살균된 배지를 무균대위에서 이미 살균된 용기에 분주한다.
⑨ Zeatin 이나 gibberellen 등과 같은 열에 약한 생장조절제나 항생제 등은 pH를 조절하여 고압 증기 살균된 배지에 0.22㎛의 micro filter로 여과 살균하여 첨가한다. 첨가할 때 배지의 온도 는 한천이 굳지 않을 정도의 낮은 온도가 좋다(40 ∼ 59℃). 조직배양에서 실험오차는 거의 전부가 배지의 제조 과정에서 비롯되므로 이것을 최소로 하기 위해서는 모든 규칙을 조심스럽게 준수하여야 한다. 배지에 성분이 첨가될 때는 미리 기록된 것을 하나씩 지우거나 표시해 가면서 하고 중요한 과정을 자세히 기록하여 후에 다시 확인이 가능하도록 한다.
4) 배지 성분의 농도
(1) 농도의 표시방법
조직배양의 인위적인 실패의 원인 중에는 농도 계산의 잘못으로 인한 것이 많기 때문에 이에 대하여 설명하고자 한다. 배지에 첨가되는 물질의 농도는 여러 가지 방법으로 나타낼 수 있는데 이 중에서 일반적으로 사용되는 것은 다음과 같다.
① 부피 백분율
부피 100중에 그 물질이 차지하는 비율이다. 예를 들면 야자유 5%는 물 950㎖에 야자유를 50㎖를 첨가하는 것이다. 좀 더 정확히 말하면 야자유 50㎖에 물을 첨가하여 총량이 1000㎖되게 하는 것이다.
② 중량 백분율
무게 100중에 용질이 차지하는 비율이다. 예를 들면 sucrose 3%는 30g의 sucrose에 물을 첨가하여 총량이 1,000㎖되게 하는 것이다.
③ Molar(M)
어느 물질의 그램 분자량을 1M로 정하고 이에 비례되는 무게는 M로 나타낸다. 예로서, IAA 1M이란 1ℓ의 물속에 그 분자량 만큼의 무게, 즉 175.18g의 IAA가 용해되어 있는 것이다. 생장조절제의 농도는 mM(1/1,000M)이나 μM은 물 1ℓ속에 IAA 0.17518g을 용해한 농도이고, 1μM은 0.00017518g을 용해한 것이다.
④ ㎎/ℓ
1ℓ의 용액 중에 들어 있는 물질의 양으로 가장 많이 사용될 수 있는 농도 표시방법이다. 이는 주로 생장조절제의 농도를 표시할 때 사용한다. 예로서, IAA 0.1㎎/ℓ는 물 1ℓ속에 0.1㎎의 IAA가 들어 있음을 의미한다. 1㎍/ℓ는 ㎎/ℓ의 1/1000이다.
⑤ part(s) per million(ppm)
백만 단위 중에 들어 있는 수이다. IAA 1 ppm은 용액 1ℓ중에 1㎎의 IAA가 용해된 것이다. 그러므로 ppm과 ㎎/ℓ는 표현을 달리 할 뿐이지 실제는 같은 농도가 된다.
※참고
㎎/ℓ, ppm 과 mole 농도를 비교하여 보면 ㎎/ℓ와 ppm은 실제의 무게를 정량하는 것이나 mol 농도는 분자량을 기준으로 하여 이것이 물에 해리 되었을 때 상태를 의미하는 것이기 때문에 ㎎/ℓ와 ppm과는 크게 다르다.
㎎/ℓ와 ppm은 오래 사용되어 많은 사람에게 익숙해져 있고 또 용액을 만들 때 용기에 있는 그대로를 정량하면 되므로 편리한 점도 있으나, 국제 식물생리협회(IAPP)는 mole 값은 사용하도록 권장하고 있다. 그 이유는 mole 은 모든 화합물에서 mole 당 분자의 수가 일정하기 때문이다. 예를 들면 1mM IAA는 1mM IBA와 동일한 분자의 수를 함유하고 있지만 1 ㎎/ℓ의 IAA와 1 ㎎/ℓ의 IBA는 이들의 분자량은 다르다. CaCl2·2H2O의 분자량은147.02이다. 이 화합물의 440 ㎎/ℓ의 농도는 2.99mM이다(440/147.02).
※ 참고 : Prefixes for units in the international system
Prefix
Symbol
Power
tetra
T
1012
giga
G
109
mega
M
106
kilo
K
103
hecto
h
102
deka
da
101
deci
d
10-1
centi
c
10-2
milli
m
10-3
micro
μ
10-6
nano
n
10-9
pico
p
10-12
femto
f
10-15
atto
a
10-18

키워드

식물조직배양,   배지의 성분,   배지의 제조