혈액실험,혈액의 조성,혈액의 일반적 기능

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목차

1. 혈액의 조성

2. 혈액의 일반적 기능

3. 혈액 검사물의 채취법
(1) 채혈 후 전혈 만드는 법
(2) 혈청 만드는 법

4. 단백질을 제거한 시료액 만들기

5. 당질 검사 방법
(1) 혈당측정(Somogyi법)
(2) 포도당 내성 검사(Glucose tolerance test; GTT)

6. 단백질 검사 방법

(1) 혈청 크레아티닌 측정(Folin-Wu법)
(2) Serum Protein 측정(Kingsley법)
7. 지질 검사 방법

(1) Serum Total Cholesterol 측정(Zak-Henly법)
(2) High Density Lipoprotein-cholesterol 측정







- 참 고 문 헌 -

본문내용

volumetric flask에 0.2N 600㎖를 넣고 sodium potassium tartrate 45g을 넣고 녹인다. , 5 15g을 넣고 완전히 녹인 후 5g을 넣어 총량이 1l 되게 0.2N 로 채운다.
3) 방법
Ⅰ. Albumin 측정
- 시험관에 혈청 0.5㎖를 넣는다.
- Sodium sulfate 용액 7.5㎖를 넣고 마개를 한 후 세게 진탕한다.
- 시험관을 15분간 방치하고 3~4㎖의 ether를 가한다.
- 시험관을 엄지손가락으로 막고 세게 흔들어 엄지손가락을 뗄 때는 조심해서 뗀다.
- 3000rpm에서 3~4분간 원심분리하면 상층은 ether층, 다음이 globulin mat, 그리고 맨 아래층 용액이 albumin용액이다.
- 이 시험관을 옆으로 조금 기울이고 가볍게 치면 globulin mat가 시험관 벽에서 떨어진다. 5㎖ 용량 피펫의 흡입구를 손가락으로 막은 후 ether층을 지나 globulin mat가 닿지 않도록 조심스럽게 피펫을 albumin 용액 속에 넣고 손가락을 떼고 하층 용액 5㎖를 다른 시험관에 취한다.
- Saline 5㎖를 넣고 biuret시약 10㎖를 넣어 섞는다.
- 시험관에 24.5% sodium sulfate용액 5㎖과 biuret시약 10㎖를 넣고 섞어 blank를 만든다.
- 두 시험관을 30~32℃에서 30분간 방치한다.
- blank에 대한 흡광도를 파장 555㎚에서 구하여 표준선에서 값을 찾는다.
Ⅱ. 표준선 작성법
- 표준용액 단백질 기질 농도의 혈청(versatol serum : 7g/이) 4㎖를 100㎖ volumetric flask에 넣고 saline으로 희석하여 총량의 100㎖되게 한다(2.8㎎/㎖).
- 다음과 같이 시험관 4개에 넣고 조작한다.
시험관
표준액
saline
biuret시약
1
2
3
4
1.0㎖
2.0㎖
3.0㎖
4.0㎖
4.0㎖
3.0㎖
2.0㎖
1.0㎖
5.0㎖
5.0㎖
5.0㎖
5.0㎖
- 잘 섞은 후 30~32℃에서 30분간 방치하여 555㎚에서 각각의 흡광도를 읽는다. 각 흡광도는 다음과 같은 농도에 해당한다.
시험관
총 단백질(㎎/㎗)
albumin(㎎/㎗)
1
2
3
4
2.3
4.6
3.9
9.2
1.79
3.58
5.38
7.17
4) 계산
표준선에서 얻어진 단백질 농도 계산은 혈청 0.5㎖에 saline 20㎖를 섞으므로 희석된 용액 1㎖중에는 혈청 0.5/20.5 = 0.0244㎖/㎖가 있는 상태이고, 그 희석 혈청 5㎖를 사용하였으므로 0.0244 ×5 = 0.122㎖의 혈청을 사용하였다.
그러므로 100㎖에 대한 희석계수는
이 된다.
따라서 1번 시험관의 경우 0.0028g × 820 = 2.3(g/㎗)이 된다.
5) 판정
- 정상치
albumin : 4.0 ~ 5.5 g/㎗
globulin : 2,0 ~ 2.9 g/㎗
A/G 비 : 1.5 ~ 2.5 (평균 20)
7. 지질 검사 방법
식생활이 서구화되면서 지질 섭취가 증가해, 고지혈증, 동맥경화증, 심장병 등 심혈관계 질환이 증가되고 있어 이러한 질병의 조기진단을 위해서는 혈청 총 콜레스테롤, 혈청 중성지방, HDL, LDL, VLDL의 판정이 요구된다.
(1) Serum Total Cholesterol 측정(Zak-Henly법)
1) 원리
cholesterol은 acetic acid(sulfuric acid) 중에서 ferric chloride와 반응하여 적갈색을 띤다(Kiliani Reaction). 본 반응색은 약 2시간 동안 안정하다.
2) 시약
- Ferric chloride-acetic acid 용액
- Working solution
- sulfuric acid(conc. 98~99%)
- standard 용액
3) 방법
- serum 0.1㎖에 ferric chloride acetic-acid working reagent 8.0㎖를 가하여 잘 섞고, 10~15분 방치한다. 그 후에 여과 혹은 원심분리한다.
- 여액 3.0㎖를 시험관에 넣고 시험관을 비스듬히 기울인 후 conc. 2.0㎖를 시험관벽을 따라 흘러 내려가도록 가하여 Vortex mixer로 곧 세게 섞는다.
- 직사광선을 피해 실온에서 20~30분 발색시킨 후 증류수를 blank로 하여 파장 560~570㎚에서 흡광도를 읽는다.
- Standard calibration curve에서 농도를 구한다.
(2) High Density Lipoprotein-cholesterol 측정
1) 원리
혈청단백분획용 cellulose acetate막이나 agarose 등을 지주체로 하여 혈청을 전기영동한다. 다음에 효소법에 의한 cholesterol 발색시약으로 발색시킨다. 이것을 505㎚에서 densitometry하여 혈청 총 cholesterol치에 대한 %를 산출한다.
2) 시약
- 영동막
- buffer(영동용)
- buffer(습윤용)
- cholesterol 발색시약
3) 방법
- cellulose acetate막을 습윤용 buffer에 충분히 습윤시키고 여과지로 물기를 제거한다.
- 혈청단백의 전기영동 술식과 같이 180V, 35분간 영동한다.
- 사용하지 않은 cellulose acetate막을 발색시약에 습윤시킨 후 전기영동이 끝난 막에 겹쳐놓는다.
- 이것을 37℃ incubator에서 30분간 incubate하여 효소반응으로 발색되게 한다.
- 반응종료 후 505㎚ filter를 사용하여 densitometry를 행한 후 각 분획의 백분율을 측정한다.
4) 계산
각 분획의 cholesterol치는 다음 공식으로 구한다.
5) 판정
* 정상치(HDL-C)
남자 : 30~65㎎/㎗
여자 : 35~80㎎/㎗
* HDL-C가 증가하는 경우
a) 체구가 마른 상태
b) estrogen, nicotinic acid, alcohol, heparin 투여시
c) familial hyperalphalipoproteinemia
* HDL-C가 감소하는 경우
a) 비대한 사람
b) estrogen 투여시
c) hypertiglyceridemia
d) 과탄수화물 식이
e) diabetes
f) analphalipoproteinemia

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