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파장 254 nm에서의 자외선은 DNA에 흡수되어 이 색소에 전달되고 파장이 302 nm와 366 nm에서는 색소 자체에 자외선이 흡수되어 590 nm의 주황색 형광 가시광선을 내게 된다. Ethidium bromide는 한가닥과 쌍가닥 DNA및 RNA 검색에 모두 사용할 수 있으나 염
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파장을 546㎚로 잡아놓는다.
2) 원심분리시킨 sample의 상등액 0.8㎖(cell debris가 포함되지 않도록 주의한다) 을 취하여 10㎜ glass well에 넣고 파장을 측정한다.
주의 : 측정값이 1 이상이 되면 희석하여 다시 측정한다.
흡광도 : 645㎚, 663㎚
5. 실험참
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파장에 따른 흡광도를 볼 수 있었다. (이때 Cr은 최대 파장이 275이므로 파장범위를 200~300를 선택하여 측정한다.)
UV를 측정할 때는 항상 Base를 따로 찍는데 이는 용매인 base물질도 빛을 흡수하기 때문에 이값을 빼주어 용질만의 흡광도를 측정
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상등액을 사용한다.
③ 각 tube에서 0.2ml을 취한 후 3ml methylate solution을 섞는다.
④ 60℃에서 15분동안 incubation 시킨다.
⑤ 0.2ml metaperiodata solution을 넣고 섞는다.
⑥ 1ml acetylacetone reagent를 넣고 섞은 후 60℃에서 15분동안 놓아둔다.
⑦ 실온까지 식힌
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상등액을 버린다. 이 때, 무게가 대칭되도록 해야 한다. 남은 상등액은 Micro pipette을 이용해 제거한다.
(3) Cell이 들어있는 tube에 S1 buffer를 250 μl 넣고 pipetting한다.
(4) S2 buffer를 250 μl 넣고 4회 inverting한다.
(※ 이 때, 반응시간이 5분을 초과하
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