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Agarose gel electrophoresis ＆ Gel elution
전기영동
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• 용액에 전류를 통했을 때 용액 중의 하전 입자가 양극 또는 음극으로 이동하는 현상
• 주로 단백질 관련 물질 또는 유사한
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Elution buffer
3) 전기영동
plsmid DNA, Agarose, 0.5X buffer, 6X Loading dye, Elution buffer, EtBr(Ethidium bromide, Size marker, Electrophoresis, Gel cast, Tray, Comb, Micropipette, Polyglove, Microwave oven, UV transilluminator
2.실험 방법
1) 대장균의 형질전환
①-70℃ 냉동고에서 Competent cell
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isolation(Ammonium acetate 법
2. DNA Restriction (Vector 제작
3. pS44 DNA restriction
4. Electrophoresis
5. PCR (polymerase chain reaction
6. Elution ;Gene clean kitⅢ(Bio101
7. Ligation
8. Competent cell 제조 (DH5α) - CaCl2 법 사용
9. Transformation (Heat shock
10. screen
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끼 워서 well을 만든다.)
3) 전기 영동 장치에 1 x TAE를 넣은 후 gel을 넣는다.
4) well의 가장 왼편에 size maker를 넣고 차례로 loading dye와 DNA를 섞은(1:5 정도) solution을 주입한다.
5) 전기를 걸어준뒤 20~30분 기다린다
6) DNA가 내려오면 자외선하에서 확
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판형 겔 (c)와 (d) 불연속 완충용액 시스템을 이용한 원통형 겔과 판형 겔
4.참고문헌
http://urizip.x-y.net/b-electrophoresis.htm
http://my.netian.com/%7Ejeojoon/elec.htm
http://dasan.sejong.ac.kr/%7Eyjlee/p-agarose%20gel.htm 1.실험원리
2.실험순서
3.고찰
4.참고문헌
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-synuclein이 22.039kd인 LDH보다 큰 값을 가지고, 이는 전기영동 이동거리로 분석한 결과와 일치한다.
agarose gel은 polyacryamide보다 큰 통로를 가지고 있어 분자량이 큰 DNA를 분리하는데 적합하기 때문에 DNA 크기 측정에 이용된다. DNA 전기영동도 단백
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3) pET 23c vector
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