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전기 영동법)
평판 겔 전기영동
Polyacrylamide gel 전기영동
Agarose
Agarose gel의 특성
선형 RNA를 분리하기 위한 Agarose 농도
Agarose gel 전기영동의 목적
Agarose 전기영동시 이동속도에 영향을 주는 요인
Agarose gel 전기영동의 방법
Buffers
Gel elution?
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법
1. plasmid isolation(Ammonium acetate 법
2. DNA Restriction (Vector 제작
3. pS44 DNA restriction
4. Electrophoresis
5. PCR (polymerase chain reaction
6. Elution ;Gene clean kitⅢ(Bio101
7. Ligation
8. Competent cell 제조 (DH5α) - CaCl2 법 사용
9. Transformation (Heat sh
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마이크로 피펫을 사용하여 겔로 loading한다. (각 샘플loading 시 새로운 팁으로 교체하며 피펫이 gel을 뚫지 않도록 빠르고 정확하게 넣는다)
3. DNA시료를 넣어준 comb 쪽은 (-)전극, 반대편은 (+)전극으로 전압을 걸어 30~40분간 100V로 전기영동을 시작
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전기영동법은 아미노산, 뉴클레오티드, 단백질 들과 같은 하전된 물질들을 분리하거나 분석하는 데 매우 효과적인 수단으로 이용된다.
Acrylamide gel은 DNA 또는 단백질의 전기영동에 이용될 수 있는데, 특히 단백질의 경우는 SDS (sodium dodecyl sulfa
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/protocols/SDS-PAGE-gel.htm
2. David L. Nelson, Michael M. Cox 공저, 2006, 생화학(상), 월드사이언스, pp92~94 1. 실험 목적
2. 실험재료 및 실험방법
(1) 실험재료
(2) 실험방법
3. 실험결과
4. Discussion
# Sample Buffer의 구성
# 전기영동의 원리
5. Reference
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법에 의한 무우 종자의 순도 검정. 서울대학교 1-27
- 이지은, 김성길(2009) DNA marker를 이용한 멜론의 일대잡종품종 순도검정. 1-5
- 김두환 DNA marker를 이용한 F₁순도 검정. 한국원예학회지 13-13
- http://joonyoungsun.tistory.com/entry
- http://100.naver.com/
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전기영동과 분자량 측정
B. Agarose gel을 이용한 DNA의 전기영동
3. LDH의 활성 측정
4. Gel filtration chromatography를 이용한 LDH 단백질의 정제
5. Ion exchange chromatography를 이용한 LDH 단백질의 정제
Ⅲ. 결론 (결과 및 고찰)
1.
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경우 효소에 의해 다시 잘려, agarose gel로 전기영동 하였을 때 vector와 insert, 이렇게 2 band로 나오는 것을 이용한 것이다.
DNA
10㎕
10×H buffer
2㎕
NdeⅠ
1㎕
XhoⅠ
1㎕
DDW
6㎕
total
20㎕
다시 PCR로 확인해 보았다.
premix에 다음과 같이 넣고 PCR을 했다.
DNA
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