|
4. Purpose : 전기영동의 의미를 이해하고 DNA의 크기 및 구조에 따른 결과차이를 이해한다. Agarose gel에 DNA와 loading dye를 넣고 전기를 걸어주면 DNA는 인산기 때문에 매질을 타고 양전하 방향으로 움직이게 된다. 이때 움직이는 속도는 DNA의 크기에
|
|
|
agarose gel을 준비한다.
0.5X TAE 50ml에 0.5 g을 넣고 끓인 후, 틀에 붓고 30분간 굳힌다.
② DNA 용액 10ul에 6X loading dye 2ul를 섞어 gel에 loading 한다.
lane 1 : Size marker
lane 2-n : DNA
③ 전기영동 100V, 40분
④ EtBr 용액에 gel을 20분간 담궈 염색(staining)한다.
⑤ g
|
|
|
마이크로 피펫을 사용하여 겔로 loading한다. (각 샘플loading 시 새로운 팁으로 교체하며 피펫이 gel을 뚫지 않도록 빠르고 정확하게 넣는다)
3. DNA시료를 넣어준 comb 쪽은 (-)전극, 반대편은 (+)전극으로 전압을 걸어 30~40분간 100V로 전기영동을 시작
|
|
|
나름대로 분석해 보세요.
참고로 아래 사진은 겨우살이 sample로 선명한 밴드를 볼 수 있습니다. 1. Metrial
2. Method
1) Agarose gel 만들기
2) Agarose gel 전기영동시 DNA의 이동에 영향을 주는 요인들
3. DNA loading dye
4. 전기영동 buffer
5. Result
|
|
|
agarose gel을 만든다. (굳힐 때는 comb을 끼워서 well을 만든다.)
3.전기영동장치에 1× TBE를 넣은 후 gel을 넣는다.
4. well의 가장 왼편에 size maker를 넣고 차례로 loading dye와 DNA를 섞은(1:5정도) solution을 주입한다.
5. 전기를 걸어준 뒤 20~30분 기다린다.
6
|
|
 |
agarose gel은 polyacryamide보다 큰 통로를 가지고 있어 분자량이 큰 DNA를 분리하는데 적합하기 때문에 DNA 크기 측정에 이용된다. DNA 전기영동도 단백질의 전기영동과 마찬가지로 큰DNA가 작은 DNA보다 멀리 이동하지 못한다. 하지만 DNA의 경우 같은
|
|
|
경우 효소에 의해 다시 잘려, agarose gel로 전기영동 하였을 때 vector와 insert, 이렇게 2 band로 나오는 것을 이용한 것이다.
DNA
10㎕
10×H buffer
2㎕
NdeⅠ
1㎕
XhoⅠ
1㎕
DDW
6㎕
total
20㎕
다시 PCR로 확인해 보았다.
premix에 다음과 같이 넣고 PCR을 했다.
DNA
|
|
메뉴펼치기
