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Enzyme
(EcoR Ⅰ, Nde Ⅰ, Xho Ⅰ)
Fig 11 . H buffer
- Tris-HCl (pH 7.5) 500mM,
MgCl2 100mM, NaCl 1000mM,
DDT(Dithiothreitol) 10mM 로 구성되었으며, 제한효소의 활성을 최대화하기 위해 pH를 조절해주는 용액이다.
Fig 12. 제한효소의 기능
- 제한효소는 DNA의 특정한 염기의
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DNA분자. cohesive end를 가지고 있지 않은 경우 ligation은 보다 복잡하고 상당히 천천히 반응이 일어난다. Cohesive-end ligation은 blunt-end ligation에 비해 100배 빨리 진행된다. 이 이유는 blunt-end fragment는 anneal할 수 없기 예비(1) 실험 제목
(2) 실험 목
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gel에 DNA marker 3ul과 ⑧번 솔루션 5ul을 각각 well에 넣어준다.
⑪전기영동기를 스위치를 누른 후 gel의 2/3정도에 bromophenol blue가 오면 멈추고 겔을 uv-transilluminator로 관찰한다. a. 실험 제목
b. 실험 목적
c. 이론
d. 실험 도구
e. 실험 방법
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제한효소를 이용해 조각내버린다. 그런데 이렇게 제한효소가 DNA를 절단시키는데 자기 자신은 절단되지 않는 이유는 바로 대장균의 메틸화 작용 때문이다. 즉, 대장균은 제한효소의 공격을 받기 전 미리 자신의 DNA를 Modification enzyme을 이용해
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제한효소
1) Type I restriction enzyme
2) Type II restriction enzyme
3) Type III restriction enzyme
■ 제한효소를 이용한 DNA의 절단
■ 전기영동 ( electrophoresis )
■ DNA 정량
(1) DNA의 농도측정 원리
(2) 분광광도계( Spectrophotometer)
4. 실험재료
5. 실험
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