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실험 목적
Plasmid DNA의 구조적 특징을 이해하고 이를 이용하여 Plasmid DNA를 Purification한다.
DNA Purification 한 것을 전기 영동을 통해서 DNA를 크기 별로 분리하여 확인한다.
Plasmid DNA
Bacteria내에서 Chromosomal DNA와는 별도로 발견되는 작은 DNA, Ch
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plasmid란 무엇인가?
2. 분자유전학적 관점에서의 plasmid의 용도와 그 기능을 간략히 서술하시오.
3. Plasmid 구조(형태)에 대해 서술하시오. (그림포함)
4. 자신의 DNA gel 사진을 첨부하시오.
5. Gel 사진을 보고 Uncut DNA, Vector, Insert DNA size를 계산하
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electrophoresis
7> gel이 굳으면 comb을 제거하고 electrophoresis tank에 gel판을 옮긴다.
8> 전기영동 tank에 running buffer(1x TAE)를 gel을 1mm정도 두께로 덮도록 채운다.
전기영동 tank와 gel은 동일한 전기영동 완충액을 사용해야 한다. 이온강도 또는 pH에
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겟다 (1)실험제목
(2)실험 재료
(3)실험 목표
(4)실험 방법
(가)해부
(나)RNA 추출
(다)RNA 농도측정
(라)cDNA 합성
(마)PCR
(바)전기 영동
(사)Gel Purification
(아)Ligation
(자)Transformation
(차)Pick up
(카)집균
(타)효소 처리
(5)실험 결과
(6)고찰
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전기영동버퍼에 넣는다.
전기영동을 한다.
실험결과(Results):
실험 4번 과정을 한 후 eppen tube 사진 입니다. Cell lysis buffer를 넣었을 때 투명했던 용액이 neutralization buffer를 넣은 후 하얗게 응고된 물질이 생겼습니다. 처음에 이 버퍼를 넣
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ygote인지, homozygote인지를 구별 할 수 있었다.
실험이 성공적으로 이루어져 깔끔한 상태의 결과를 확인할 수 있었고, 어떤 것이 자식 오염주인지 전기영동 결과를 통해 알 수 있었다. 한 개의 종자(4번)만이 대립되는 두 allele을 갖지 못하여, 1개
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전기영동을 이용하여 단백질과 DNA의 크기를 측정하는 네 번째 실험에서 α-synuclein의 크기는 38.619kd, LDH의 크기는 22.039kd였고 DNA중 하나는 초나선구조, 하나는 선형구조를 갖는다.
먼저 단백질은 SDS-PAGE를 이용하여 크기를 구했는데 SDS는 계면
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갔을 경우 효소에 의해 다시 잘려, agarose gel로 전기영동 하였을 때 vector와 insert, 이렇게 2 band로 나오는 것을 이용한 것이다.
DNA
10㎕
10×H buffer
2㎕
NdeⅠ
1㎕
XhoⅠ
1㎕
DDW
6㎕
total
20㎕
다시 PCR로 확인해 보았다.
premix에 다음과 같이 넣고 PCR을 했
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asmid가 가진 항생제 내성을 가질 수 있다. 따라서 항생제 배지에서 키움으로 써 plasmid가 숙주에 잘 들어갔는지 확인할 수 있다. 우리 실험에서 pGEM-T easy vector는 ampicillin에 내성이 있기 때문에 LB agar 배지에 ampicillin을 깔고 conformation된 E. coli들을
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