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ponceau S 용액으로 단백질의 발현 유무를 확인한다.
4. Introduction
① Western blotting
전기영동 기술은 생체 용액에 있는 개개의 단백질 성분을 분리하는데 기본적인 기술이었다. 종이나 전분(starch), agarose 등이 단단하고, 반응성이 없으며, 대
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Detection
IV. Discussion
1. Stacking gel과 resolving gel의 차이
2. Running buffer와 transfer buffer의 조성 차이 및 그 역할
3. TTBS에 Tween-20을 넣는 이유
4. Direct detection과 indirect detection
5. Analysis of Results
① Transfer (with Ponceau S staining)
② Detection
V. References
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Ponceau S stanining이 사용된다.
Transfer의 결과로써, membrane상에 위치된 단백질의 결합부위는 BSA, hemoglobin, gelatin, non-fat milk와 같은 non specific protein과 tween 20과 같은 detergent로 구성된 blocking agent를 사용하여 non-specific binding을 막는다.
western실험에서
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Ponceau S에 15분간 담가 놓았다가 꺼내, 물로 씻어
band가 잘 나왔나 확인한다.
(Ponceau S는 한 번 쓰고 버리지 말 것)
8) 샤알레 위에 NC를 놓고, 1% BSA-TBST을 적정량 부어, 항온기안 Dance위에 30분간 놓아둬 block시킨다.
* 1% BSA (bovine serum albumin)
BSA 0.5g /
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Ponceau S staining: transfer buffer로 wash하면 없어짐
(destaining with transfer buffer)
4) Blocking: antibody가 붙는 것을 막기 위한 것임.
여러 가지 모인 protein: 5% skim milk(지방 뺀 분유), 깨끗한 protein: 5% BSA
그림 2. Blocking
5) Primary antibody
그림 3. Primary antibody
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