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Xho1으로 잘려진 형태로 존재한다. 그래서 다음과 같은 Plasmid가 존재하는 Com.cell이 존재할 수 있다.
정상적인 결합
(pGEX6P-1 + GeneX)
GeneX끼리 결합
pGEX6P-1끼리 결합
Amp 배지에서 생존가능,
정상적 발현
Amp배지에서 사멸
Amp 배지에서 생존 가능하나
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Xho I의 band가 하나 밖에 나오지 않았다. 소량의 restriction enzyme이나 restriction buffer를 다룸에 있어 미숙하였기 때문인 것 같다. 발광 정도를 더 늘려서 확인하였을 때에야 더 size가 작아 밑에 위치하는 band를 확인할 수 있었는데, 이는 size가 큰 조
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기와 가깝지만 넣어준 제한효소의 양 등 오차로 인해 조금 크기가 다르게 측정되었다. 다음으로 4조는 Eco R I &Xho I를 넣어주었기 때문에 Fig 11.에서의 두 제한효소가 작용했다고 보면 1.7kbp와 나머지 부분을 더한 0.8kbp+5.5kbp=6.3kbp 두 개의 DNA 단편
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Xho Ⅰ)
Fig 11 . H buffer
- Tris-HCl (pH 7.5) 500mM,
MgCl2 100mM, NaCl 1000mM,
DDT(Dithiothreitol) 10mM 로 구성되었으며, 제한효소의 활성을 최대화하기 위해 pH를 조절해주는 용액이다.
Fig 12. 제한효소의 기능
- 제한효소는 DNA의 특정한 염기의 배열을 식별하고, 이
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Xho1으로 자른 뒤 그것이 PGEX6P-1과 genex가 나왔는지를 확인하는 실험이다. 지난시간 실험했었던 gene의 형태는 supercoiled form 이었기 때문에 agarose 결과 3kb에 해당하는 6번째 marker에서 확인 할 수 있었는데, 이번 실험에서 제한효소 bamh1과 xho1으로
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경우 효소에 의해 다시 잘려, agarose gel로 전기영동 하였을 때 vector와 insert, 이렇게 2 band로 나오는 것을 이용한 것이다.
DNA
10㎕
10×H buffer
2㎕
NdeⅠ
1㎕
XhoⅠ
1㎕
DDW
6㎕
total
20㎕
다시 PCR로 확인해 보았다.
premix에 다음과 같이 넣고 PCR을 했다.
DNA
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