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His tag의 경우 Ni2+ 이온이 있는 컬럼을 이용하여 흡착시켜 분리할 수 있다. 꼬리표는 적절한 처리를 통해 목적 단백질의 말단 부위로부터 떼어낼 수 있다.
■장점
: 특정 펩티드 또는 다른 단백질과 결합하여 목적단백질을 발현시키면 목적 단
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사능을 사용하지 않는다는 이점이 있다.
항체에 결합되는 효소중에는 간단한 substrate 용액을 넣어주면 색깔을 띠는 반응이 이용되는데 대표적 효소로 Alkaline phosphatase 나 HRP(Horseradish peroxidase) 등이 많이 사용되고 있다 이들 효소는 Ab의 Fc region
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tting
Tag결합단백질(P177)
Reocombinant protein 정제: His-Tag
Protein Purification
EGFP and GFP
Blotting ?
Principles of Western blotting
RNA interference (RNAi) technology
His-Tag
SDS-Page
Southern blotting
Northern blotting
Western blotting
A. structure of siRNA, B. mechanism of RNA-
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His-tag을 이용하여 bacterial cell로부터 protein을 추출하고자 할 때, 구체적인 cloning site를 정하고 design 하시오.
+ 2번 문제 참고
7. 만약에 cloning은 정상적으로 되었는데 단백질 추출이 되지 않았을 경우, bacterial cell 내에서 무슨 일이 일어났을지
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His-tag가 부착된 재조합 단백질을 E. coli에서 발현시킨 뒤, Ni-NTA 컬럼을 이용해 1차 정제를 진행했습니다. 이후 size exclusion chromatography로 순도를 95%까지 높였고, SDS-PAGE로 확인했습니다.\"
43. 효소 활성 측정 실험 경험을 설명해 주세요.
\"효소의 K
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