[생화학 실험] his-tag 항체를 이용한 웨스턴 블랏 분석 (Western Blot Analysis using His-Tag Antibody)

목차

1. 실험제목
2. 실험일자
3. 목적
4. 원리
5. 시약 및 기자재
6. 방법
7. 결과
8. 고찰
9. further study
antibody(항체)를 이용한 실험의 원리

본문내용

사능을 사용하지 않는다는 이점이 있다.
항체에 결합되는 효소중에는 간단한 substrate 용액을 넣어주면 색깔을 띠는 반응이 이용되는데 대표적 효소로 Alkaline phosphatase 나 HRP(Horseradish peroxidase) 등이 많이 사용되고 있다 이들 효소는 Ab의 Fc region에 covalent bond가 형성되도록 화학반응을 이용하여 결합시켜 사용한다. 이러한 효소반응에 의한 발색을 통해서 Antigen의 양을 측정할 수 있다.
2.
Y. Joseph Woo MD et al(2005), Stromal cell-derived factor and granulocyte-monocyte colony-stimulating factor form a combined neovasculogenic therapy for ischemic cardiomyopathy, The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery 130, p.321-329
3. Monoclonal vs polyclonal antibody
Polyclonal Ab: 동물내로 injection된 protein과 같은 하나의 antigen에 반응한 많은 수의 다양한 B lymphocyte에 의해 형성된다. B lymphocyte의 집단 내 cell들은 antigen 내의 특이하고 다양한 epitope에 결합하는 항체를 생산한다. 따라서 polyclonal antibody는 protein의 다양한 부분을 인지하여 Ab의 혼합체로 이루어진다.
Monoclonal Ab: cell culture에서 성장한 동일한 B lymphocyte(하나의 clone)집단에 의해 합성된다. 이러한 Ab는 단일성을 가져서 모두 같은 epitope를 인지한다. monoclonal Ab는 따라서 훨씬 높은 antigen specificity를 보인다.
Reference
-학부생화학실험(2) 후반부 교재
-http://blog.naver.com/killer3br?Redirect=Log&logNo=45814630
-Boyer, 2000. Modern experimental biochemistry.3rd edition. p.321-329, Benjamin Cummings press.
-Lodish.2003. Molecular cell biology 5th edition p.614, p178-180, p187. Freeman

키워드

항체,   western blot,   단백질 분리,   his tag,   웨스턴 블랏,   생화학 실험,   생물 실험