[분자유전학실험]6.Western blot

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Material & Method
4. Result
5. Discussion
6. Reference

본문내용

살펴보면 잎과 줄기 모두에서 heat stress를 가해 주었을 때 시간이 지남에 따라 그에 반응하여 band의 굵기나 진하기가 더 두껍고 진해졌으며, 이는 DcHSP 17.7이 heat stress에 반응하여 더 오랜 시간동안 heat stress를 받을수록 더 많이 발현되었음을 알 수 있다. 그리고 band의 굵기나 진하기는 잎에 비하여 줄기가 더 진하고 굵은 것을 볼 수 있는데 이는 heat stress가 가해지면 잎보다 줄기에서 더 많은 양의 heat shock protein이 발현되었음을 알 수 있다.
Western Blotting에 사용하는 Antibody에는 polyclonal antibody와 monoclonal antibody두 가지가 있다. monoclonal antibody는 특이적이라 정확히 하나에만 결합이 가능하나polyclonal antibody는 monoclonal antibody에 비해서 특이적이지 않아서 비슷한 여러 개의 결합이 가능하다. 실험에서 17.7KDa부근 말고도 그보다 더 큰 부분에도 band가 형성된 것을 볼 수 있는데 이는 우리가 사용한 primary antibody의 종류가 이 polyclonal antibody이기 때문이다. 따라서 우리가 원했던 DcHSP 17.7과 비슷한 다른 protein에도 항체가 붙어 band가 형성된 것이라고 볼 수 있다. 하지만 다른 band에서도 heat shock에 대하여 시간이 지남에 따라 더 많이 발현된 경우도 볼 수 있었는데 이는 DcHSP 17.7말고도 다른 heat shock protein이 추출한 protein에 포함되었을 가능성도 있다고 본다.
지난 실험에서 우리는 SDS-PAGE를 통해 크기별로 분리하여 염색하고 살펴보았을 때 단지 단백질의 패턴정도나 동일한 양이 loading되는 것만을 확인할 수 있었지 우리가 원하는 DcHSP17.7의 발현여부는 확인할 수 없었다. 하지만 이번실험은 antibody를 이용하여 western blotting 함으로써 우리가 원하는 미량의 DcHSP17.7을 보다 정확하게 검출할 수 있었으며 그 발현여부를 분석해 볼 수 있다. DcHSP17.7는 식물체 내에서 heat shock에 대해 반응함으로써 그 시간에 따라 많은 양을 발현한다는 것을 알 수 있다.
6. Reference
분자생물학, 아카데미서적, 김병흥 저, 315~317pp
분자생물학 노트, 유전공학연구소, 곽주원외 2인, 158~162pp
http://www.cartage.org.lb/en/themes/sciences/lifescience/generalbiology/physiology/
LymphaticSystem/Antibodymediated/Antibodymediated.htm
http://blog.naver.com/hfotena?Redirect=Log&logNo=40117614188
http://blog.naver.com/stagent?Redirect=Log&logNo=100035828001
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담당 교수님

키워드

Western blot,   SDS-PAGE,   ELISA (Enzyme-linked immunosobent assay, 효소결합 ,   다클론 항체와 단일클론 항체