SDS PAGE, Western blotting 자료

소개글

SDS PAGE, Western blotting 자료에 대한 보고서 자료입니다.

목차

1) SDS-PAGE에서 단백질이 분리되는 원리
2) SDS
3) Stacking gel과 running gel의 역할
4) Disulfide bond를 끊어주는 reducing agent

Western blotting
1.Chemiluminescent Detection
2.Bioluminescent Detection
3.Chemifluorescent Detection
4.Fluorescent Detection
5.Autoradiography
6.Colorimetric Detection

본문내용

orophore를 붙인 2차 항원를 사용한다. 이 방법은 chemiluminescent detection에 비해 dynamic range가 10배 이상 좋기 때문에 detection limit 안에서 linearity가 좋으며 정량이 정확하다. 또한 Fluorescent detection은 multiplexing이 가능하다. 즉 다양한 fluorophore를 사용하여 한 blot에서 동시에 다양한 단백질을 확인할 수 있는 장점이 있다.
5.Autoradiography
방사성 동위원소는 label probe로 주로 35S, 32P, 33P, 14C, 125I를 사용한다. Radioactivity를 측정하기 위해 주로 autoradiography을 사용한다. Autoradiography는 큰 투자 없이 좋은 민감도와 resolution을 제공한다. 직접 autoradiography를 측정할 경우 1-2 order의 linearity를 가지며 이 범위 안에서 film에 signal을 확인할 수 있다.
Bio-Rad 사의 Molecular Imager FX family와 같은 Phosphor imager는 정확한 정량이 가능한 storage phosphor screen을 사용하여 정확한 정량이 가능하다.
6.Colorimetric Detection
여러 가지 기질들은 2차 항체에 결합되어 있는 HRP나 AP 등의 효소에 의해 색깔을 띠는 침전물을 만들게 된다. 가장 일반적으로 사용하는 AP의 기질은 2-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphate/Nitroblue Tetrzolium (BCIP/NBT)이며 HRP의 기질은 4-chloro-1-naphthol (4CN)이다. 침전물이 모이게 되면 색깔을 통해 눈으로 확인할 수 있다. 이 효소 반응은 원하는 만큼의 signal이 보여질 때 반응을 멈추게 하여 결과를 확인한다. 이 방법은 어떤 film을 이용한 detection 방법보다 방법이 편리하다. Colorimetric sample는 GS-800 densitometer를 사용하여 쉽게 분석할 수 있다.
Colorimetric detection은 radioisotopic이나 chemiluminescent detection과 비교하여 중간 정도의 민감도를 가진다. 그러나 Bio-Rad 사의 colorimetric system은 chemiluminescent 만큼의 높은 민감도를 제공하고 있다.

키워드

SDS PAGE ,   Western blotting,   이온화,   전기 영동 이동성