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Assay
BCA Assay의 첫 번째 단계는 Cu2+가 Cu1+로 바뀌는 Biuret reaction이고, 두 번째 단계는 BCA가 Cu1+과 화합물을 형성해서 purple색을 내고 562nm에서 흡수되는 과정이다. BCA에 의한 단백질 측정 범위는 0.2~50ug이다. BCA의 장점으로는 사용되는 buffer에 의한
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Bradford Assay가 Lowry method와 다른 점은 단백질에 매우 특이적이라는 것이다. 각각의 단백질에 대한 반응이 다양한데다, 반응이 끝난 후 흡광을 일으키는 CBBG의 종류가 한 가지가 아닌데다, 부분적으로 그 흡광도가 겹치기 때문에 정확한 표준 곡
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bradford method를 통하여
standard curve를 그리고, protein의
concentration을 측정한다.
실험 이론
1. 단백질 정량
단백질 정량은 알고자 하는 시료의 단백질의 양이나 농도를 정량적으로 알아내는 것
① Kjeldahl assay
② Lowry assay
③ BCA method
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Lowry method 에서는 Folin 시약을 넣을때 30초 간격으로 넣어주고 정확히 45분뒤에 다시 30초 간격으로 순서대로 흡광도를 측정해 주어야하는데 이것을 정확하게 하지 않아서 오차가 커진 원인이 되었을 가능성도 있다.
이번 실험은 지난번 실험이
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Bradford solution이 assay법에서 요구되는 유일한 reagent이며, 단백질과 Bradford Solution의 반응은 2분안에 완결되고 발색정도는 1시간까지 안정하게 유지된다. Bradford assay의 sensitivity는 Lowry method를 능가하며 미량 정량법을 사용할 경우 1ug까지도 정량
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