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dium dodecyl sulfate) - unfolding 된 단백질을 (-)로 하전 시킨다.
전기영동의 원리를 좀 더 자세히 살펴보아 여러 buffer 속의 이온 및 분자들이 하는 역할을 생각해보자.
전기영동용 완충용액에 포함된 glycine은 음전하와 양전하를 동시에 띨 수 있는 zwi
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sample(100ng/㎕) 2㎕씩 첨가, PCR 수행
(2) Agarose gel electrophoresis
A. 1% Agarose gel mixture
Agarose 1 g
TAE Buffer 100 ml
1. microwave 1 min
2. Etbr(5mg/ml) 10 ㎕ 넣고 붓기
B. loading sample 준비, gel running
1. PCR mix 20 ㎕에 (X6) loading buffer 4 ㎕ 첨가
2. sample loading
3. 80 V 30 min,
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loading buffer와 섞고 80℃에서 2분 incubation한다. 6% denaturing polyacrylamide gel에 sample을 loading한다. 60W ~3시간정도 까지 바닥에 10 cm안으로 gel을 run시킨다.
17. 조심스럽게 glass gel plate를 제거한다. gel위에 Whatman 3MM filter paper를 올리고 gel과 filter paper 사
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sample의 size를 알기 위해 이미 알고 있는 size들을 모아 standard로 사용하는 것
Loading buffer
- 보통 6x를 사용분자량이 큰 glycerol 등 무거운 물질이 함유되어 있어서 아가로즈의 well에 DNA를 넣어 줄때 DNA 용액을 무겁게 하여 아래로 가라앉히는 역할
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loading buffer, tray, micropipet & tips, tubes, marker
② 실험 방법
PCR로 얻어낸 sample을 agarose gel에 loading 하여 electrophoresis 한다.
6. 실험 결과
Electrophoresis의 결과로 다음 사진과 같은 결과를 얻었다.
위 사진에서 보다시피 오른쪽의 6개가 실험 결과인데,
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loading하는 용액이 equilibration 단계의 buffer A와 같은 조건이 되도록 diafiltration step을 거친다. Chromatography는 buffer A로 equilibration 시킨 후 발효 액을 loading 한다. Elution 시켜주기 위해 0.2 M의 NaCl 등 eluant buffer를 5bed volumes으로 흘려준다. 마지막으로
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