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um dodecyl sulfate) - unfolding 된 단백질을 (-)로 하전 시킨다.
전기영동의 원리를 좀 더 자세히 살펴보아 여러 buffer 속의 이온 및 분자들이 하는 역할을 생각해보자.
전기영동용 완충용액에 포함된 glycine은 음전하와 양전하를 동시에 띨 수 있는 zwitt
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sample(100ng/㎕) 2㎕씩 첨가, PCR 수행
(2) Agarose gel electrophoresis
A. 1% Agarose gel mixture
Agarose 1 g
TAE Buffer 100 ml
1. microwave 1 min
2. Etbr(5mg/ml) 10 ㎕ 넣고 붓기
B. loading sample 준비, gel running
1. PCR mix 20 ㎕에 (X6) loading buffer 4 ㎕ 첨가
2. sample loading
3. 80 V 30 min,
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loading buffer, tray, micropipet & tips, tubes, marker
② 실험 방법
PCR로 얻어낸 sample을 agarose gel에 loading 하여 electrophoresis 한다.
6. 실험 결과
Electrophoresis의 결과로 다음 사진과 같은 결과를 얻었다.
위 사진에서 보다시피 오른쪽의 6개가 실험 결과인데,
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1. Date
14 April 2006
2. Subject
단백질 정량, SDS-PAGE의 원리 및 SDS-polyacrylamide gel의 제조
3. Object
전기영동에 관한 원리 및 기본적인 지식을 익히고, 지난 실험에서 만들어 놓은 Buffer 용액들을 정량 하여 Gel-loading sample을 제작한다. 또한 SDS-po
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50mM KCl이 포함된 bufferC로 평형을 맞추어 준 후, sample을 loading 한다. Biorex 70은 (-)charge를 띄는 물질로, DNA에 binding하고 있는 Taq pol이 일부 (+) 전하를 띄고 있다는 점에 착안하여 Biorex 70를 포함하는 ion exchange chromatography를 실행하여 DNA에 붙은 Taq po
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loading하는 용액이 equilibration 단계의 buffer A와 같은 조건이 되도록 diafiltration step을 거친다. Chromatography는 buffer A로 equilibration 시킨 후 발효 액을 loading 한다. Elution 시켜주기 위해 0.2 M의 NaCl 등 eluant buffer를 5bed volumes으로 흘려준다. 마지막으로
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