3 그람염색(예비)

소개글

3 그람염색(예비)에 대한 보고서 자료입니다.

목차

1. Subject
2. Object
3. Principle & Theory
4. Apparatus & Reagents
5. Procedure
6. Reference Books
-참고문헌

본문내용

자연계에 널리 분포하는 비병원성(非病原性) · 호기성(好氣性) · 간균(桿菌)의 일종. 공기중은 물론 마른 풀 · 하수 · 토양 중에 존재한다.
편모(輔毛)가 있어 활발히 운동하며 균체의 중앙에 원형 또는 난원형(柳圓形)의 아포(芽胞)를 형성한다.
보통의 배지(培地)에서도 잘 발육하며 회백색의 큰 취락(聚落)을 형성하고 그 주위 논 방사상을 이룬다.
아포를 갖고 있으므로 건조나 고온에 대한 저항력이 극히 강하며, 균체는 글리코겐을 함유하는 그람 양성균으로서 다수의 탄수화물을 분해하여 산을 생성한다.
30~70℃에서 가장 잘 증식하며 50~56℃의 고온에서도 잘 발육하지만 120℃ 증기 속에서 15분이면 사멸한다.
쌀밥이 부패하는 원인도 이 균에 의한 경우가 많으며, 비병원성이지만 불결물에 의해 안구(眼球)가 손상되었을 때에는 결막염·홍채염 등 만성화농증 등을 일으킬 수 있다.
2. 대변장구균 (Enterrococcus faecalis)
장관에 거주하는 그람양성의 연쇄상구균이다. 대부분의 사람과 동물의 장에 살고 있다. 운동성이 있으며 글루코스를 생산하며, 이때 가스를 발생시키지 않는다. 혈액한천에서 성장시킬 수 있으며, 이때 용혈성 반응이 일어난다. 항균 저항 작용을 하고 이를 여러 방면에서 사용되고 있다. 인체에 감염 시 내막염, 방광, 전립선 등에 염증을 일으키지만 신경계에는 감염이 거의 없다.
3.대장균 (Escherichia coli)
간균(桿菌)에 속하는 장내 세균의 하나. 1885년에 에셰리키아가 대변에서 최초로 분리한 균으로 대체로 비병원성 균이며, 인체 및 각종 동물의 장 안에 서식하고 배설물에 의해 자연계에도 널리 분포하고 있다.
특히 하수에 많으며 대장균의 존재량은 배설물에 의한 오염도와 거의 비례하므로 수질검사 등의 지표로 사용되고 있다.
그람 염색에 음성을 나타내며 크기는 너비가 0.4~0.7μ 이고 길이가 1~4μ 이다.
편모가 있어 운동성을 가지며 아포는 없다.
생물학적으로 포도당 · 젖당 · 맥아당을 분해하여 산과 가스를 낸다.
열에 대한 저항성이 약하여 60℃에서 20분 정도 가열하면 멸균되나 물이나 토양 중에서는 오랜 시간 살아 있다.
김충환(2004), 밀레니엄 미생물학, 정문각, p.41
그람 양성/음성
형태
Bacillus subtilis
양성
간균
Escherichia coli
음성
간균
Enterrococcus faecalis
양성
구균
5. Procedure
<시약 제조>
1. Methylene blue 조제법
1) Methylene blue 0.15g을 Ethyl alcohol 15mL에 용해시킨다.
2) Potassium hydroxide 0.005g을 dH2O 50mL에 용해시켜 '1)'의 용액과 혼합한다.
2. Crystal Violet 용액
1) 95% ethyl alcohol 10mL에 Crystal violet 0.15g을 용해시킨다.
2) 증류수 40mL에 Ammonium oxalate 0.4g을 용해시킨 후, '1)'의 용액과 혼합한다.
3. 옥도 용액
1) Potassium Iodine 0.25g을 37.5mL의 dH2O에 용해시킨다.
2) 위의 용액과 Iodine crystals 0.125g을 첨가한다.
4. Safranin
1) Safranin 0.125g을 95% ethyl alcohol 5mL에 용해시킨다.
2) 여기에 증류수 50mL를 첨가한다.
(2) 미생물의 형태학적 관찰 방법
-단순 염색법-
1. Slide glass를 준비하여 dH2O를 한 방울 떨어뜨린다.
2. 백금이를 Alcohol lamp에 멸균하여 식힌 후 약간의 균주를 묻혀 dH2O와 골고루 섞고 도말한다.
3. 공기 중에 1분 건조시킨 후 열을 고정하기 위해 Alcohol lamp의 불꽃을 2~3회 빨리 통과시킨다.
4. Methylene blue로 staining(염색)을 하기 위해 균이 덮히는 정도의 염색약을 떨어뜨려 약 1분 정도 염색시킨다.
5. 45° 기울여 흐르는 물로 염색약을 washing
6. 남아있는 수분을 제거한 뒤 건조시켜 Immersion Oil을 한 방울 떨어뜨려 고배율로 관찰한다.
-그람 염색법-
1. Slide glass를 준비하여 dH2O를 한 방울 떨어뜨린다.
2. 백금이를 Alcohol lamp에 멸균하여 식힌 후 약간의 균주를 묻혀 dH2O와 골고루 섞고 도말한다.
3. 공기 중에 1분 건조시킨 후 열을 고정하기 위해 Alcohol lamp의 불꽃을 2~3회 빨리 통과시킨다.
4. 열 고정한 Slide glass를 Crystal violet으로 덮고 60초 간 놓아둔다.
5. 수세하지 않고 95% Ethyl alcohol로 탈색시킨다. (다량의 보라색이 씻겨 나갈 때까지 알코올이 smear를 통해 흐르도록 한다. 너무 과하게 탈색시켜서는 안 된다.)
6. 즉시 멸균수로 씻는다.(알코올에 의한 탈색이 지속되는 것을 방지하기 위함이다.)
7. 물로 씻은 후 슬라이드를 종이 수건이나 흡수지로 빨아들이고, 나머지는 공기 중에 건조시킨다.
8. 염색된 슬라이드를 현미경으로 관찰한다.
6. Reference Books
최호형(2004), 미생물학, 아카데미 서적, p.18~20(이하 그림 1-5, 1-6, 1-7, 1-8 포함)
최호형(2004), 미생물학, 아카데미 서적, p.20~23(이하 그림 1-9, 표 1-1 포함)
방병호, 박헌국, 심상국 외 5명(2002), 미생물학 실험, 진로연구자, p.23~24
오계헌, 강형일, 소재성 외 2명(2010), 최신 미생물 실험, 신광문화사, p.48
방병호, 박헌국, 심상국 외 5명(2002), 미생물학 실험, 진로연구사, p.231~233
방병호, 박헌국, 심상국 외 5명(2002), 미생물학 실험, 진로연구자, p.24
사이언스올 과학백과사전, '1.고초균~3.대장균' (그림 포함)
http://www.scienceall.com/dictionary/dictionary.sca?todo=scienceTermsView&classid=&articleid=247282&bbsid=619&popissue
김충환(2004), 밀레니엄 미생물학, 정문각, p.41

키워드

미생물의약품,   그람염색,   미생물실험,   단순염색