[만점레포트] 항체 생성 면역 반응 유도, 생성된 항체의 확인과 정량적 분석

소개글

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목차

I. Purpose & Backgrounds
1) Sandwich ELISA의 원리 (실험원리)
2) TI antigen과 TD antigen
-TI antigen: Type 1, Type 2
3) B cell의 isotype class switching
-proliferation cytokines: IL-2, IL-4, IL-5
-differentiation cytokines: IL-2, IL-4, IL-5, IFN-γ, TFG-β

Ⅱ. Methods
1. cell preparation
※cell counting 방법
2. stimulator로 stimulation
3. capture antibody coating
4. blocking
5. sample과 standard dilution의 preparation
6. standard와 sample loading
7. detection antibody, streptavidin, OPD acid stock
8. plate read를 통한, secretion된 IgM과 IgG level의 측정

Ⅲ. Results
Ⅳ. Discussion

본문내용

Ⅰ. Purpose
1. 실험조건 및 목적
실험대상으로는 B cell line인 WEHI cell을 사용하였다. WEHI cell에 아래 다섯 가지의 서로 다른 조건의 stimulator들을 넣은 뒤, B cell을 48시간 동안 activation 시킨다. 이후 Sandwich ELISA를 통해, 각 stimulator들에 의해 B cell에서 secretion된 total IgM, IgG level을 측정하고자 한다.
※stimulator의 5가지 조건(conditions)
①control (media)
②LPS lμg/ml
③anti-IgM lμg/ml
④anti-IgM lμg/ml + CD40 lμg/ml
⑤anti-IgM lμg/ml + CD40 lμg/ml + IL4 20ng/ml

→실험원리 및 실험 조건 설정의 이유
1)실험원리(Sandwich ELISA의 원리): detection하고자하는 antibody인 IgM과 IgG에 binding하는 antibody(anti-IgM과 anti-IgG)를 well에 coating한후, wash한다. well에 IgM과 IgG level을 detection하고자하는 sample을 넣어주고 충분한 reaction time이 지난 뒤, wash한다. 이후 biotin이 conjugation되어있는 detect antibody(anti-IgM과 anti-IgG)를 넣어주고 wash한뒤, HRP가 conjugation되어있는 streptavidin를 넣어주고 wash한다.

키워드

sandwich ELISA,   TI antigen,   TD antigen,   isotype class switching,   proliferation cytokines,   differentiation cytokines,   항체 정량 분석,   항체 생성 면역 반응,   항체