그람염색법, 현미경 사용법

목차

(1) Gram positive, negative 차이

(2) 현미경의 구조와 사용법

본문내용

e alcohol (destaining soln)
- 95% Ethyl alcohol - 250ml
Acetone - 250ml
4) Safranin O solution (대조염색약)
- Safranin O - 2.5g
95% Ethyl alcohol - 100ml
D.W. - 500ml
5) 실험 순서
① 슬라이드 글라스를 alcohol로 깨끗이 닦는다.
② 슬라이드 글라스위에 멸균 증류수를 한 방울 떨어뜨린다.
③ 배지에서 배양된 균을 백금이로 소량 떼어 내어 슬라이드 글라스위의 멸균 증류수에 넓게 펴서 도말한다.
④ 슬라이드 글라스 위에 수분이 사라지도록 공기 중에 건조 시키고, 거의 다 건조가 되 면 alcohol lamp 위를 통과시키면서 불꽃에서 고정한다.
⑤ crystal violet staining solution을 충분히 가하고 약 1분간 염색한다.
⑥ staining solution을 버리고 증류수로 수세 후 iodine solution을 충분히 가하고 약 1 분간 반응시킨다.
⑦ destaining solution(ethanol)을 사용하여 10~20초간 탈색시킨 다음 증류수로 탈색제를 씻어낸다.
⑧ 대조염색으로 safranin O solution을 가하고 30초간 염색.
⑨ 증류수로 염색액을 씻고 건조시킨다.
⑩ 커버글라스를 덮고 현미경으로 관찰 (X40, X100)
⑪ 관찰한 상을 기록한다.
Ⅳ. Result
- 1~8조까지 모두 대장균을 가지고 실험을 하였다.
대장균은 그람 음성균으로써 크리스탈 바이올렛에 염색되지 않고, 사프라닌 용액에 붉게 염색되어야 하는데, 관찰 결과 대장균이 염색이 되긴 하였지만 검은색으로 보였다.
이 사진은 인터넷에 다른사람의 실험사진이다.
실험결과로 오른쪽 사진같이 나왔어야 하는데
왼쪽의 사진처럼 검은색으로 보였다.
[400X] [870X]
Ⅴ. Discussion
- 염색은 되었으나 왜 대장균이 검은색으로 보이는지 생각해 보았다.
① 염색 및 탈색이 제대로 이루어 지지 않은 것 같다.
그람 음성균인 대장균은 크리스탈 바이올렛-요오드 복합체에 염색이 되기는 하나 에탄올에 의해 탈색이 된다. 이 탈색과정에서 완벽히 탈색이 이루어진 것 같지 않아 약간의 보라색의 요오드 색깔이 남아있을 수 있다고 여겨진다. 여기에 사프라닌의 붉은색까지 염색이 되어 색이 겹쳐 더 어두운색이 되었을 것 이라고 생각된다. 혹은
사프라닌이 염색이 잘 되지 않아서 붉은색으로 보이지 않았을 것 같다.
② 현미경 작동 법
현미경에서 가장 중요한 부품은 대물렌즈로 피검체를 확대할 뿐만 아니라 상의 선명 도를 높이는 데에도 결정적인 역할을 한다. 분해능(해상력)은 렌즈가 아주 가까운 두 점을 구별하는 능력을 말한다. 시료에 빛을 조사하는 방법에 따라서 현미경의 분 해능이 달라지는데 이를 제대로 조작하지 않아서 피검체가 검게 보일 수도 있다고 생각하였다.
Ⅵ. References
- 네이버 백과사전
- 미생물학 5판 : 라이프 사이언스 (역자 : 김경민 외 6명)
17-20p. 25-26p. 52-56p. 405p.

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식품,   식품미생물학,   식품미생물학실험,   그람염색,   그람,   현미경,   식품공학,   미생물학실험