Yeast two-hybrid 분석 실험, 형질전환, 플라스미드 DNA 정제 실험 합동 보고서

소개글

Yeast two-hybrid 분석 실험, 형질전환, 플라스미드 DNA 정제 실험 합동 보고서에 대한 보고서 자료입니다.

목차

1. Introduction
2. Materials & Method
3. Result
4. Disscussion
5. Reference

본문내용

LexA를 잡고 있는 BD domain과 AD가 상호작용하게 되면 LacZ가 transcription 되어 β-galactosidase가 발현되어 X-gal을 분해하기 때문에 X-gal stanning에 의해 Blue colony가 나타나는 것이다. 이때 Blue colony와 White colony에는 A라는 물질의 첨가(+), 또는 비첨가(-)의 구분이 있다. 이때 A물질은 X-gal plate의 제작과정에서 멸균 후 첨가하는 potassium phospate(pH 7.0), galactose 또는 X-gal로 추측해 볼 수 있다. 그 이유는 우선 potassium phospate(pH 7.0)는 pH 7.0으로의 복구를 통해 크기가 작고 supercoiled form으로 되어 있는 plasmid DNA를 renature시키는 역할을 하기 때문에 첨가되지 않으면 정상적인 plasmid의 expression이 일어나지 못하기 때문이고, galctose가 첨가 되지 못하면 LacZ의 발현이 일어나지 않으므로 당연히 β-galact-
-osidase가 발현되지 않는다. 그리고 X-gal은 β-galactosidase와 만나 푸른색을 띄는 염색약으로 첨가되지 않을 경우에는 정상적인 hybrid가 반응되었어도 확인해 볼 수가 없게 된다. 이와 같은 분석은 White colony역시 정상적인 hybrid 할 수 있는 조건을 가지고 있거나 정상적인 hybrid가 일어난 경우라고 볼 때의 원인분석이고, White colony가 정상적인 hybrid가 생기지 않은 경우에는 다음과 같은 원인분석이 가능하다. 우선 plasmid가 삽입된 양이 적어 AD나 BD의 발현양이 적은 경우이다. 또는 LexA plasmid(EGY48)가 삽입이 적었을 수도 있다. 또는 이와 같은 분석과정은 영양 요구성을 통해 정상적으로 삽입된 yeast를 분리하는 과정을 통해서 보면 본 실험에서 사용한 Trp,His,Leu의 양이 yeast를 분리를 하기 적은 양일 수도 있다. 마지막으로 이번 실험에 사용한 DMSO는 실험에서 transformation을 하기 위해 Heat shock과정 전 10% DMSO를 넣어줌으로써 cell wall과 membrane을 modify하여 transformation의 efficiency를 극대화시키는 목적이었지만 이기능이 적절히 일어나지 않았음을 생각해 볼 수도 있다. 참고로 본 실험에서 사용한 DMSO는 Dimethylsulfoxide의 약자로써 극성 비플로톤 용매이며, 무색투명하고 흡수성이 강한 용제이다. 이 밖에 실험상 부주의나 실험자의 실험과정 상의 실수로 인한 결과도 생각할 수 있다.
5. Reference
http://tong.nate.com/impresser/9173824
http://www.biologicalprocedures.com/bpo/arts/1/16/m16.htm
James D. Watson외 5명, 2004, Molecular Biology of the gene 5E, CSHL press, pp485~488

키워드

Yeast two-hybrid,   플라스미드 DNA,   형질전환,   실험보고서,   실험수업,   분자생물학과