웨스턴 블롯팅

소개글

웨스턴 블롯팅에 대한 보고서 자료입니다.

목차

웨스턴 블롯팅(Western Blotting)

1. 웨스턴 블롯팅이란

2. 방법

3. 참고사항

4. 실험절차

5. 시약

6. 사용 증례

본문내용

단백 CREB(cAMP responsive element binding protein)의 발현 검출
서로 전혀 성질이 다른 갑상선암 세포(CA77 cell)와 자궁경부 상피세포암 세포(HeLa cell)에서 전사조절 단백 CREB이 발현되고 있는지 알기 위하여 두 가지 세포를 배양하여 핵추출물을 만든 후, SDS-PAGE를 시행하여 nylon 흡착지에 전기이동하고 CREB의 항체를 일차항체로 이용하여 웨스턴 블롯팅을 시행하였다.
유전자 재조합법으로 대장균에서 생산하여 분리해낸 20ng의 CREB과 CREB항체가 결합하여 보인 띠와 핵추출물에서 보인 띠가 동일한 위치에서 유사한 정도의 밀도로 관찰되었다.(그림 2). 이것은 두 가지 세포에서 상당히 많은 양의 CREB이 발현되고 있음을 시사한다.
그림 2. 세포 핵추출물들 속에 CREB이 존재함을 보이는 웨스턴 블롯팅.
쥐의 갑상선 수양암(medullary carcinoma)세포주인 CA77 세포와 자궁경부암(cervix carcinoma)세포주인 HeLa 세포의 핵추출물을 50㎍씩 10% SDS-폴리아크릴아미드 겔에서 전기영동한 후 nylon 흡착지에 전기이동하였다. 분자량 표지자는 biotin으로 표지된 단백질 복합물을 사용하였고, 일차항체는 CREB항체(anti-CREB antibody)를 사용하였다. 가장 우열측에는 박테리아에서 발현시켜 정제한 쥐의 CREB을 2ng 사용하였는데, 이것의 분자량은 이미 알려진 바와 같이 43kd 임을 알 수 있으며, CA77과 HeLa 세포의 핵추출물을 사용한 경우에도 동일한 위치에 CREB이 존재함을 보여주고 있다.

키워드

웨스턴 블롯팅,   전기영동,   면역 블롯팅