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주제 : 단백질 분리정제 및 기능분석
실험일시 : 2008년 3월 11일 2:00p.m.~ 4:30p.m.
목적 : Column chromatography의 준비로서의 buffer만들기
실험목표 : 1M의 Tris-HCl (pH7.4), NaCl, MgSO4 Stock solution을 제조한 후 다양한 NaCl 농도의 elution buffer를 만든다.
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buffer의 용량을 맞췄다. buffer가 만들어지는 것은 실험 때 TRIS에 HCl을 점점 많이 첨가할수록(pH 7.4에 가까워질수록) pH의 변화가 점점 줄어드는 것을 통해 알 수 있었다.
실험에 필요한 용액들의 농도를 1.5배에서 수백 배 크게 만들어 희석시키는
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원하는 밴드 외에 나타난 다른 단백질의 밴드를 없애기 위해 바꿔줘야 할 condition은 무엇일까?
Q2) Affinity chromatography 중에서
Ni-NTA vs. GST(glutathione S-transferase) →elution 원리의 차이
Q3) SDS-PAGE에서 APS, TEMED, sampling buffer조성
5.Reference
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1. Date
31 March 2006
2. Subject
단백질 분리정제 및 기능분석: 개요 및 column chromatography 준비
3. Object
단백질을 분리정제 및 기능분석을 하기 위해 몰 농도와 Buffer 용액에 대한 개념을 익히고, column chromatography를 작동시키는 데에 필요한 Buffer 용액
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chromatography(ion-exchange chromatography)는 column chromatography의 한 종류로 gel 여과 chromatography와 병행한 일반적인 정제방법이며, 가용성 단백질의 대부분에 걸쳐 적용이 가능하다.
이온교환 크로마토그래피의 정지상은 다양한 종류의 기능기가 부착된
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단백질 정제
1) buffer
2) buffer의 pH를 구할 수 있는 equation: Henderson Hassalbalch equation
3) 몰농도
4) buffer를 만드는 법, 계산과정
5)실험도구 및 과정
2. ion-exchange column chromatography
1)column chromatography의 원리
2)resin
-anion exchanger
-cation exchanger
3)elut
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단백질을 결합시킨 column에 서서히 염 농도를 증가시켜 단백질을 용출한다. 특징은 대표적인 chromatography로 단백질의 처리능 및 분리능이 모두 높아 저압 chromatography의 초기 정제 및 중고압 chromatography에 의한 최종단계의 정제에 적용되고 있다.
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정제 방법과 그 조작법
3.1 지용성물질의 추출 정제방법
3.1.1 배양액으로 부터 지용성물질의 추출법
3.1.2 조추출물 (crude extracts)로 부터 지용성물질의 분리정제
3.2 수용성물질의 분리 정제 방법
4. 분리정제의 실험예
4.1 Promothiocin A와 B 및
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정제하여 이용하는 경우도 있다. 어느 쪽이든 더욱 좋다고 말할 수 없지만, 항혈청으로서 깨끗하다면 정제할 필요는 없다.
Monoclonal 항체를 만들기에는 면역한 마우스로부터 항체 생산세포를 분리하여 배양하고, 그로부터 목적의 단백질에 대
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실험(2) 후반부 교재
-http://en.wikipedia.org/wiki/Aziridine
-http://en.wikipedia.org/wiki/Protein_purification
-http://blog.naver.com/hgsaem?Redirect=Log&logNo=150005363105 1. 실험제목
2. 실험일자
3. 제출자
4. 목적
5. 원리
6. 시약 및 기자재
7. 결과
8. 고찰
9
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