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크로마토그래피 (Chromatography)
② Ion-exchange chromatography
③ 단백질 정량법 (Bradford assay)
5. Materials & Apparatus
※ Coomassie Blue G dye
※ BSA(bovine serum albumin)
6. Methods
※ 주의사항
7. Results
8. Discussion
9. Reference
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coomassie briliant blue G
AA Lys에 결합하는 dye
1X SDS Gel-loading buffer(/L)
50mM Tris-Cl(pH 6.8)
14.4mM 2-mercaptoethanol
Disulfide bond 파괴
Protein의 unfolding
2% SDS
Protein folding 방지
0.1% bromophenol blue
전개시 표시를 해주는 dye
10% glycerol
용액에 잠기게 함
염색액(/L)
1g Coomass
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d 정량방법은 Coomassie Blue G 염색약이 단백질과 결합함으로서 생기는 파장의 변화를 측정(단백질에 있는 아르기닌과 aromatic 잔기에 결합된 anion form의 이온을 통해 595㎚에서의 흡광도를 측정)하는 것입니다. 장점으로는 정량시간이 매우 빠르고
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분자량의 크기에 의해서만 양극(+)으로 이동한다. 단백질의 특징
단백질의 구조 1차,2차, 3차, 4차 구조의 특징
단백질의 정제방법 크로마토그래피-겔여과 크로마토그래피, 이온교환크로마토그래피, 친화크로마토그래피, 전기영동
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Coomassie Brillant Blue G-250이 단백질과 결합하여 붉은 색이 푸른 색으로 변하고 최대흡수파장이 495nm에서 595nm로 옮겨지는 것을 이용하여 단백질의 농도를 정량하는 방법이다. 이 방법은 2분안에 측정이 끝나므로 매우 신속한 방법으로 재현성이
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