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아가로오스 겔을 통한 DNA의 이동속도는 DNA 분자의 크기, 아가로오스의 농도, DNA의 형태, 전류의 세기, 염기 조성 및 온도 등에 좌우된다.
(2) 겔에서의 전기영동의 원리
겔은 3차원의 그물구조[網目構造:공극크기]를 가지는 것으로 생각되며,
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마이크로 피펫을 사용하여 겔로 loading한다. (각 샘플loading 시 새로운 팁으로 교체하며 피펫이 gel을 뚫지 않도록 빠르고 정확하게 넣는다)
3. DNA시료를 넣어준 comb 쪽은 (-)전극, 반대편은 (+)전극으로 전압을 걸어 30~40분간 100V로 전기영동을 시작
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ree flow zone electrophoresis), 모세관 전기영동(capillary electrophoresis) 등이 있다.
이동 경계면 전기영동은 U자형 튜브의 완충용액 안에서 수행되며, 전기영동을 마친 후에는 굴절률(refractive index)의 변화로 시료가 어디에 있는지 검출할 수 있다. 장치
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전기영동 된 정도를 알 수 있게 하는 역할을 한다.
*전기영동 buffer
TAE (Tris acetate EDTA) : DNA 분자량이 큰 경우, agarose electrophorsis에서 쓰인다.
TBE (Tris borate EDTA) : DNA 분자량이 작은 경우, DNA sequencing에 쓰인다.
Commonly used electrophoresis buffers
Buffer
Con
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아가로오스 겔을 통한 DNA 의 이동속도는 DNA 분자의 크기, 아가로오스의 농도, DNA의 형태, 전류의 세기, 염기 조성 및 온도 등에 좌우된다. (1) 전기영동의 원리
(2) 전기영동의 종류
1. 이동계면 전기영동법 (Moving boundary electrophoresis)
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ote인지, homozygote인지를 구별 할 수 있었다.
실험이 성공적으로 이루어져 깔끔한 상태의 결과를 확인할 수 있었고, 어떤 것이 자식 오염주인지 전기영동 결과를 통해 알 수 있었다. 한 개의 종자(4번)만이 대립되는 두 allele을 갖지 못하여, 1개의
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전기영동을 이용하여 단백질과 DNA의 크기를 측정하는 네 번째 실험에서 α-synuclein의 크기는 38.619kd, LDH의 크기는 22.039kd였고 DNA중 하나는 초나선구조, 하나는 선형구조를 갖는다.
먼저 단백질은 SDS-PAGE를 이용하여 크기를 구했는데 SDS는 계면
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경우 효소에 의해 다시 잘려, agarose gel로 전기영동 하였을 때 vector와 insert, 이렇게 2 band로 나오는 것을 이용한 것이다.
DNA
10㎕
10×H buffer
2㎕
NdeⅠ
1㎕
XhoⅠ
1㎕
DDW
6㎕
total
20㎕
다시 PCR로 확인해 보았다.
premix에 다음과 같이 넣고 PCR을 했다.
DNA
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