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측정
6. 고찰
7. 숙제
공통이온효과란?
흡광도란
DNS
8. 참고문헌
UV-Vis spectrophotometer 사용법
[ 측정 시 유의해야 할 점 ]
[ UV-VIS Spectrophotometer - Beer\'s law ]
흡광도란?
효소의 활성화 에너지
[ DNS 시약 만들기 ]
9. 출처
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효소화학, 청문사, 2001
정동효, 효소학계론, 대광서림, 2000
장호남, 생물화학공학, 방한출판사, 1997
Biology 2e·Claude A, Villee 외 5명, Saunder college publishing, 2000 Ⅰ. 개요
Ⅱ. 효소의 분류
1. 산화환원 효소(oxidoreductase)
2. 전이효소(transferase)
3.
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효소반응속도 실험원리
2. 1. 1 효소
2. 1. 2 효소의 특이성
2. 1. 3 효소의 작용에 영향을 주는 요소
2. 2 화학반응역학
2. 2.. 1 질량작용의 법칙
2. 2. 2 반응차수와 실험반응식 p
2. 3 Enzyme kinetics
2.
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효소는 손이나 땀 등에도 있기 때문에 혼입을 막기 위해 장갑과 마스크를 반드시 착용해야 한다.
- 사용하는 tube와 피펫 팁, 용액 등은 멸균해 핵산 분해효소를 불활성시켜둬야 한다.
4. 실험 방법
< PCR mixture >
Total 50 μl
DNA template
2 μl
Nucle
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측정한다.
(8) Enzyme activity 및 효소반응 초기속도를 구한다.
(9) Lineweaver-Burk plot을 이용하여 1/V vs. 1/S curve를 작성한다.
(10) Michaelis-Menten equation을 구한다.
5. 실험참고사항
(1) 선택한 기질의 농도가 너무 낮거나 높으면 기질의 농도와 반응속도의
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효소는 Xho Ⅰ → Nde Ⅰ → EcoR Ⅰ의 순서로 넣어준다.
DDW
8μl
DNA
7μl
10x H buffer
2μl
Enzyme
각 1μl
Total
20μl
Table 1. 반응 용액 만들기
(2) 37 ℃의 Incubator에서 1시간동안 반응시킨다.
(3) 전기영동기기에 Agarose gel을 넣고 TAE buffer (1X)를 gel이 잠길 때까
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영양 생화학 실험
Glutathione Peroxidase 활성 측정
96 well plate, pipette, centrifuge, spectrophotometer
PBS, calibrator, d.w,
Working reagent ( assay buffer, glutathione, NADPH, GR enzyme)
H2O2 , Gpx (glutathione peroxidase), sample (1~4)
Gpx의 효소활성도를 측정함으로써 특정 시료의
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enzyme)
H2O2 , Gpx (glutathione peroxidase), sample (1~4)
3.
실험 목적
및
원리 목적 Gpx의 효소활성도를 측정함으로써 특정 시료의 항산화능을 알 수 있다.
원리 ↓ Gpx (Glutathione peroxidase) ↓G.R (Glutathion reductase)
2GSH + H2O2 → GS̵
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라 많은 차이가 있으므로 정확한 방법이 될 수는 없다.
6. 효소활성의 측정법
미생물이 생육하면 세포량과 세포수가 증가하고 이때 호흡능력, 발효능력 등의 효소활성이 증가한다. 그러므로 특정한 효소활성을 지표로 하여 생육을 추정하는
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효소는 기질에 의해 '포화' 되어 더 이상 빨리 작용하지 않는다.
References
강빈구 외 12명 1996.02.25 세포 생물학 정문각 P 55~56
강신성 외 7명 2001.01.30 생물과학 아카데미 서적 P 233~234
강만식 외 4명 1996.08.20 현대 생물학 교학 연구사 P 127~128
Lehninger
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