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4 (10x)
2㎕
Mini-prep한 plasmid
10㎕
D.W
7㎕
Nde I
0.5㎕
Nco I
0.5㎕
2.1% agarose gel에서 전기영동하여 mini-prep한 plasmid의 size가 정확한지 확인한다.
(이 때, loading dye가 들어있지 않기 때문에, 반드시 DNA loading dye(6x)를 첨가한 후에, gel에 loading한다.)
※실험 방
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I. 실험 목표
Plasmid DNA는 bacterial cell의 소기관으로서 transformation 등 다양한 곳에 사용된다. 본 실험은 다양한 실험에 필요한 plasmid DNA만을 얻는 mini-prep 실험을 진행하고, nanodrop 기기를 통해 정제한 plasmid DNA sample의 순도를 측정하는 것을 목표
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mini-prep/
Reference 9 : http://blog.naver.com/chs831/220541011406
Reference 10 :
https://namu.wiki/w/%EC%A0%84%EA%B8%B0%EC%98%81%EB%8F%99
Reference 11 : http://blog.daum.net/soar7007/7965306
Reference 12 :
http://blog.naver.com/PostView.nhn?blogId=j1076&logNo=220187921226&parentCategoryNo=&categor
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. 결과 및 토의
- 마이크로 파이펫으로 정확한 양을 얻기 위해 팁을 매번 갈아준다는 것을 알았다.
- 원심분리기와 vortexing 기기를 이 실험을 통해 알게 되었다,
- Etoh, Rnase, t.e buffer 등을 통해 Rna등 섞여 있는 불순물을 제거한다는 것을 알게 되
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k)하게 진행된다. Plasmid에서 코드되는 RNAII molecule이 primer로 작용, ori 에 binding하여 DNA polymerase I과 함께 replication이 일어난다. 이때 RNAII에 complementary한 RNAI이라는 RNA molecule이 RNAII와 hydrogen bond로 결합하면 RNAII가 oriV에 binding하지 못하여 replication
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