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1. Date
12, 19 May 2006
2. Subject
Western blot: 항체반응 및 시료검출
3. Object
Western blot의 SDS-PAGE 및 membrane transfer 과정의 원리를 익힌다. 항체반응을 하기 위하여 용액들을 만들어 membrane에 넣고 blocking을 한 후, BCIP/NBT를 기질로 이용하여 검출한다.
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BCIP/NBT를 기질로 이용한 발색 법과 CDP-Star, 또는 CSPD를 이용하는 화학 발광법이 있다.
[ECL solution]
ECL solution은 두 개로 구성되어 있다. 하나는 루미놀이 들어있는 solution이고 하나는 과산화 수소와 enhancer가 들어있다. 과산화수소와 enhancer가 들어
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BCIP/NBT)이며 HRP의 기질은 4-chloro-1-naphthol (4CN)이다. 침전물이 모이게 되면 색깔을 통해 눈으로 확인할 수 있다. 이 효소 반응은 원하는 만큼의 signal이 보여질 때 반응을 멈추게 하여 결과를 확인한다. 이 방법은 어떤 film을 이용한 detection 방법보
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BCIP sol + NBT sol. (모두 냉장보관)
* AP buffer
100mM Tris
100mM Nacl
5mM MgSO2
pH를 9.5로 맞춘다.
* NBT sol: NBT 100mg/ 70% DMF(dimethylformamide) 2ml
* BCIP sol: BCIP 100mg/ 100% 을 2ml
20) washing 한 것을 비우고 발색제를 넣어 30분간 항온기에 둔다.
21) 30분쯤 지나면, band가 예
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