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1. 실험제목 : Plasmid DNA preparation
2. 실험목적 : Ampicillin에 대하여 저항성을 지닌 E. coli (XLI-Blue, Amp-r) 의 plasmid DNA【pBluescript SKⅡ(+)】를 isolation 한다.
3. 실험원리
1. Plasmid 란?
-플라스미드는 박테리아의 세포안에 존재하는 박테리아 크로모좀 이외
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60 mL (MW=98.14, 29.44 g)
Glacial acetic acid 11.5 mL
DW 28.5 mL
⑤ TE buffer (100 mL)
10 mM Tris-HCl (pH 8.0) (MW=121.1, 0.3 g)
1 mM EDTA (pH 8.0) (MW=372.2, 0.04 g)
⑥ Ethanol, 70% Ethanol, Phenol/Chloroform/Isoamyl alcohol (각각 100 mL)
⑦ Spectrophotometer, 1.5 mL Eppendorf Tube, Microcentrifu
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대하여 저항성을 지닌 E.coli의 plasmid의 DNA를 isolation하는 것이였다. chromosomal DNA와 plasmid DNA는 서로의 크기와 구조의 차이 때문에 분리가 가능했다. chromosomal DNA가 plasmid DNA보다 훨씬 크고, 형태도 chromosomal DNA는 linear DNA인 반면에 plasmid DNA는 closed
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DNA형테는 Vector형태이지만 잘려지고 나면 linear형태로 변하기 때문에 잘렸을때의 DNA size가 더 크게 나타나는 것으로 볼 수 있다. 실제로 우리가 사용한 pBluescript SKII(+)의 사이즈는 2.961kbp로 실험값과 거의 흡사하다. (1) 실험 제목
(2) 실험
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DNA의 농도를 계산 하는 것으로 끝이 나지만, 실험기계의 이상으로 인한 부득이 하게 농도측정을 할 수 없었다.
Reference
1. University of queensland diamantia institute
\" The Alkaline Lysis Mini-Plasmid Preparation\"
2. 위키백과 “에틸렌다이아민테트라아세트산“
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plasmid의 lac gene에 잘 삽입이 되면 lac fragment가 만들어지지 않아서 x-gal이 분해되지 않고 white를 띈다. 또, ligation 할 때, vector와 DNA의 ratio를 잘 맞추는 것이 중요하다. 무조건 1:1이 아니라 길이, molar 농도를 참고 해서 맞춰야 한다. ligation이 잘 되
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DNA라도 초나선구조는 표면적이 작기 때문에 전기영동에서 빨리 이동하고 선형구조는 초나선에 비해 표면적이 크므로 늦게 이동하기 때문이다. 본 실험에서는 똑같은 플라스미드 DNA에 제한효소를 처리 한것과 하지 않을 것을 사용하였으므로
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DNA 기술은 1953년 유전자가 DNA라는 사실과 DNA의 구조가 밝혀지면서 예견될 수가 있었다.
이 재조합 DNA 기술은 박테리오파지와 플라스미드에 관한 연구와 DNA에 작용하는 효소들, 특히 제한효소와 DNA리가아제에 관한 연구 등에 의하여 발견된
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플라스미드 DNA 정제, 유전형질의 전환(Tranfomation), ELISA assay, transfection, 단백질추출, 약물효능평가, 동물실험을 진행...(이하생략) - 자기소개서
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