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gel에 걸어도 3개의 bend가 관찰된다. gel에서 DNA의 이동은 원리는 크게 두 가지로 나뉜다. 첫 번째가 size, 두 번째가 steric이다. 먼저 size가 작으면 가벼워서 멀리까지 이동가능하고, DNA의 steric이 작으면 멀리까지 이동가능하다. 여기서는 plasmid DNA
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Restriction Enzyme(BamH 1, Xho 1) 으로 digestion 한 DNA(gene X+ pGEMTE)를 새로운 벡터인 pGEX6P-1에 넣고, 결과적으로 ligase 하는데 목적이 있다.
또한 이번실험에서는 우선 Gel electrophoresis 후 Gene을 분리시켜 Gel이 표지된 부분만을 잘라, Gel을 녹여, 다시 추출하
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Digestion of DNA, Electrophoresis of DNA-2
1.Introduction
-1. Digestion of DNA란
-2. 제한효소를 이용한 Digestion
-3. 3가지의 제한효소
*Reference
세포생물학 실험Ⅱ
Exp.5,6 Digestion of DNA, Electrophoresis of DNA-2
2. Material
3. Method
4. Result
5. Discussion
*Refer
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Gel Electrophoresis
3.21.~28.
Enzyme digestion & Gel extraction
4.4.
Ligation & Transformation
4.18.
Agarose gel electrophoresis & Confirm the plasmid DNA
4.25. 1. Plasmid Mini prep & PCR & Agarose Gel Electrophoresis
3.21.~28.
2. Enzyme digestion & Gel extraction
4.4.
3. Ligation
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효소와 절단 인식자리
6) 전기영동(electrophoresis)
(1) 전기영동의 정의와 원리
(2) 완충액
(3) Gel loading buffer
(4) DNA의 가시화(Visualization)
(5) 전류
7) PCR(Polymerase Chain Reaction)
(1) PCR이란?
(2) PCR에 필요한 재료
(3) PCR의 원리
(4) PCR-RFLP(Restriction Fragment Len
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restriction enzyme이 자르는 장소이다. 따라서 원하는 gene을 알고 있는 장소에 넣을 수 있다. 먼저 ligation하기 전에 plasmid랑 삽입하고자 하는 gene을 모두 같은 restriction enzyme으로 처리해 주면, 대부분 sticky end를 만들기 때문에 plasmid와 gene 사이에 H-bo
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전기영동과 분자량 측정
B. Agarose gel을 이용한 DNA의 전기영동
3. LDH의 활성 측정
4. Gel filtration chromatography를 이용한 LDH 단백질의 정제
5. Ion exchange chromatography를 이용한 LDH 단백질의 정제
Ⅲ. 결론 (결과 및 고찰)
1.
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갔을 경우 효소에 의해 다시 잘려, agarose gel로 전기영동 하였을 때 vector와 insert, 이렇게 2 band로 나오는 것을 이용한 것이다.
DNA
10㎕
10×H buffer
2㎕
NdeⅠ
1㎕
XhoⅠ
1㎕
DDW
6㎕
total
20㎕
다시 PCR로 확인해 보았다.
premix에 다음과 같이 넣고 PCR을 했
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