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Ligation-mediated PCR (LM-PCR) for genomic sequencing and footprinting
(1) 서론
(2) Materials and Methods
2.1 Genome DNA Preparation
2.2 Chemical Cleavage
2.3 First Primer Extension
2.4 Ligation
2.5. PCR
2.6. Gel Electrophoresis
2.7 Electroblotting
2.8 혼성화 합성 탐침
2.9 Hybridization
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와준다. 이 과정 역시 세게 흔들면 안 되는데 chromosomal DNA가 나오게 되면 앞으로의 과정에서 플라스미드와 따로 분리해 낼 방법이 없기 때문이다. buffer3를 넣어 pH를 7로 복구가 되면 크기가 작고 supercoiled form을 유지하고 있던 플라스미드는 비
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PCR 증폭하였다. 결과 (그림2)에서 보여지는 바와 같이, lane6, template 0.4pg의 존재하에서도 products가 형성됨을 알 수 있다. ligation시 이용되는 insert DNA의 양 (100ng)을 고려해 볼 때 실험에 이용된 agar sample에는 대략 10pg의 insert DNA가 포함되어 있음을
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PCR product purification
03. Ligation of termini created by restriction enzymes
이제 양끝에 제한효소부위를 가지는 insert DNA 와 동일한 제한효소 부위를 가지는 vector가 준비 되었습니다. 그러면 서로 이어 붙여야겠죠.
여기서 이용이 되는 효소가 바로 DNA ligase
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PCR의 산물의 전기영동(electrophoresis)
PCR product purification
Ⅱ. 얻은 유전자를 vector에 삽입
1) Vector
※ Vector의 기능
※ Vector의 종류
2) Restriction enzyme
※ Recombinant DNA
※ 제한효소 (restriction enzyme)
3) DNA ligation과 T-vector를 이용한 PCR product의 c
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PCR의 기본 원리
Watson, Baker, Bell, Gann, Levine, Losik // 2010년 2월 18일 // 왓슨의 분자생물학 6판//p746-748
Watson, Baker, Bell, Gann, Levine, Losik // 2010년 2월 18일 // 왓슨의 분자생물학 6판//p748 Abstract
Introduction
Materials and Methods
Results
Discussion
Disc
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