|
Mini prep & PCR & Agarose Gel Electrophoresis
3.21.~28.
Enzyme digestion & Gel extraction
4.4.
Ligation & Transformation
4.18.
Agarose gel electrophoresis & Confirm the plasmid DNA
4.25. 1. Plasmid Mini prep & PCR & Agarose Gel Electrophoresis
3.21.~28.
2. Enzyme digestion & Gel extracti
|
|
|
I. 실험 목표
Plasmid DNA는 bacterial cell의 소기관으로서 transformation 등 다양한 곳에 사용된다. 본 실험은 다양한 실험에 필요한 plasmid DNA만을 얻는 mini-prep 실험을 진행하고, nanodrop 기기를 통해 정제한 plasmid DNA sample의 순도를 측정하는 것을 목표
|
|
|
miniprep 단계가 끝난다.
이제 miniprep을 하였으니 전기영동을 해서 정제한 플라스미드 DNA를 확인해야한다. tube에 bromophenol을 넣고 well에 잘 로딩하고 버퍼를 넣어준 후 전압을 가해 분리를 일으킨다. well을 로딩하는 쪽은 (+)전하 쪽으로 해주어야
|
|
|
r 4 (10x)
2㎕
Mini-prep한 plasmid
10㎕
D.W
7㎕
Nde I
0.5㎕
Nco I
0.5㎕
2.1% agarose gel에서 전기영동하여 mini-prep한 plasmid의 size가 정확한지 확인한다.
(이 때, loading dye가 들어있지 않기 때문에, 반드시 DNA loading dye(6x)를 첨가한 후에, gel에 loading한다.)
※실험
|
|
|
여러 개의 plasmid가 관찰되는 것을 알 수 있다. 크기가 8000kb이지만 그 위쪽과 아래쪽에도 희미하게 띠가 관찰된다. 이는 실험 과정 중 세포벽과 세포막을 깨고 녹이면서 plasmid DNA가 조각났기 때문인 것으로 추측되고 위쪽 띠는 8000kb보다 큰 단
|
|
메뉴펼치기
