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Restriction Enzyme(BamH 1, Xho 1) 으로 digestion 한 DNA(gene X+ pGEMTE)를 새로운 벡터인 pGEX6P-1에 넣고, 결과적으로 ligase 하는데 목적이 있다.
또한 이번실험에서는 우선 Gel electrophoresis 후 Gene을 분리시켜 Gel이 표지된 부분만을 잘라, Gel을 녹여, 다시 추출하
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효소마다 다른 buffer solution의 문제(pH, salt)등을 들 수 있다. 따라서 star activity를 억제하려면 제한효소마다 각각 다르긴 하지만 낮은 glycerol 농도, 중성 pH, 높은 염 농도 상태 등으로 극복할 수 있다.
3) Cloning과 Subcloning에 대해 간단히 조사하시오
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Restriction enzyme
※ Recombinant DNA
※ 제한효소 (restriction enzyme)
3) DNA ligation과 T-vector를 이용한 PCR product의 cloning
Ⅲ. 유전자가 삽입된 DNA를 세포 내로 주입
1) Transformation
2) 항생제와 LacZ를 이용한 seletion
※ 항생제를 이용한 selection
LacZ를
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ac.kr/biochem_workshop/restriction_enzyme.php
http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_workshop/DNA_ligation.php 1. 실험제목
2. 실험목적
3. 실험원리
1) 플라스미드의 정의
2) Plasmid의 특징
3) 플라스미드 분리 및 정제 방법
4)PCR
5) 제한효소
6) ligation of DNA
4
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효소
1) Type I restriction enzyme
2) Type II restriction enzyme
3) Type III restriction enzyme
■ 제한효소를 이용한 DNA의 절단
■ 전기영동 ( electrophoresis )
■ DNA 정량
(1) DNA의 농도측정 원리
(2) 분광광도계( Spectrophotometer)
4. 실험재료
5. 실험방법
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restriction enzyme이 자르는 장소이다. 따라서 원하는 gene을 알고 있는 장소에 넣을 수 있다. 먼저 ligation하기 전에 plasmid랑 삽입하고자 하는 gene을 모두 같은 restriction enzyme으로 처리해 주면, 대부분 sticky end를 만들기 때문에 plasmid와 gene 사이에 H-bo
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