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법은 이보다 흔한 방법인 2차 항체가 효소로 표지되고 1차 항체에 대한 특이성을 갖고 있는 것이다. 이 경우, 항체가 고정된 항원에 결합한 위치에서 다중 효소 분자들이 localization으로부터 신호가 증대된다. 색원체 기질을 발광성 물질로 대체
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Immunoblotting (=western blotting)
1) SDS-PAGE: size별로 분리
(꼬여 있는 것이 SDS와 heat로 인해 펴짐, charge density가 일정).
2) Transfer of membrane
그림 1. Protein transfer
3) Ponceau S staining: transfer buffer로 wash하면 없어짐
(destaining with transfer buffer)
4) Blocking: ant
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luminol은 빛 에너지를 방출하면서 바닥 상태로 떨어진다. 단백질 immunoblotting에서 발생된 빛은 고정된 항원에 도달하고 이것이 사진으로 검출된다. 이 방법의 western blotting은 standard colorimetric assay방법보다 10배 이상의 감도를 보인다.
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