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ye를 2ul 넣어야 하는데 total volume이 12ul이 넘어버리므로 18ul로 해준다.
4. comb을 넣을 때는 거품이 생기지 않게 기울여서 넣는다.
5. 파란색 dye가 밑에 올때까지 전기영동 하는데 너무 끝에까지 닿지는 않게 한다. 단백질이 빠져버리기 때문이다.
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luminol은 빛 에너지를 방출하면서 바닥 상태로 떨어진다. 단백질 immunoblotting에서 발생된 빛은 고정된 항원에 도달하고 이것이 사진으로 검출된다. 이 방법의 western blotting은 standard colorimetric assay방법보다 10배 이상의 감도를 보인다.
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단백질을 membrane으로 전사하기 위한 kit제작 방법을 배운 다음 gel transfer를 하여, 단백질을 membrane으로 전사한다. 마지막으로 ponceau S 용액으로 단백질의 발현 유무를 확인한다.
4. Introduction
① Western blotting
전기영동 기술은 생체 용액에
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western blot 또는 2차원 전기이동(2D)에 이용할 수 있다.
2) Western blot
Western blotting은 SDS-PAGE를 행한 후, 단백질을 membrane에 전사하는 기법으로, 목적하는 단백질의 존재 여부, 위치, 양 등을 확인하기 위해 항체를 이용해 특정 단백질을 검
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만들 때의 오류: 검출 시약을 만들 때 3가지의 시약을 적절한 비율로 혼합하여 만든다. 이 때 피펫팅을 적절히 하지 못하여 시약을 잘못 만들었을 때 실험이 오차가 생길 수 있다. 1. 실험에 대한 고찰
2. 단백질 전기영동과 Western blot
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