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주제 : 단백질 분리정제 및 기능분석
실험일시 : 2008년 3월 11일 2:00p.m.~ 4:30p.m.
목적 : Column chromatography의 준비로서의 buffer만들기
실험목표 : 1M의 Tris-HCl (pH7.4), NaCl, MgSO4 Stock solution을 제조한 후 다양한 NaCl 농도의 elution buffer를 만든다.
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50ml인 것을 이용해 연립방정식을 풀면 표를 채울 수 있다.
30mM
NaCl
100mM
NaCl
150mM
NaCl
200mM
NaCl
Elution
Buffer A
aml
aml
aml
aml
Elution
Buffer B
bml
bml
bml
bml
Total
Volume
50ml
50ml
50ml
50ml
①aml10mM+bml1000mM=50ml30mM
a+b=50
a=48.99, b=1.01
②aml10mM+bml1000mM=50ml100mM
a+b=50
a=45.45,
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만들기
1.2 1,2차 Seeding
2. Harvest
2.1 Harvest
2.2 Cell lysis
3. Protein purification
3.1 Buffer 만들기
3.2 Affinity chromatography packing
3.3 Sample 준비
3.4 Sample loading
3.5 Resin washing
3.6 Sampling
4. Dialysis
4.1 Buffe
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만들기
1M-NaOH는 40g/l이다. 그러므로 4g/100ml와 같다. 100ml 메스 플라스크에 4g의 NaOH를 넣고 표시선까지 증류수를 채우면 1M-NaOH를 만들 수 있다. 만든 1M-NaOH 1ml에 99ml의 증류수로 희석하면 0.01M-NaOH를 구할 수 있다.
③ Buffer Soln. 만들기
Buffer Soln.은
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buffer 150ml를 세포 위에 뿌려주고 scraper로 긁어주어 화학적인 분해뿐만 아니라 물리적으로도 세포가 분쇄되도록 한다.
5. 이 세포 추출물들을 tube에 담아 centrifuge로 분리하여 상등액에 있는 단백질들을 추출.
(2) Gel 만들기 – 이 과정부터
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