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plasmid으 lwlrwjq적인 유입을 통해 형질전환을 시키는 것이다.
transfection은 일반적으로 배양된 진핵생물 세포에 유전자 DNA를 주입하여 세포의 형질을 변화시키는 방법을 말한다 (bacteria transformation과 비슷). 보통 전체 세포중 수 ~ 수십%에서 transfe
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하여 보관을 하고 필요한 경우에는 오 염이 되지 않도록 주의하여 DNA만 따로 분리하여 보관한다.
주의점 : cloning을 할 때에는 contamination에 항상 유의하여야 한다. 사람의 타액, 피부 (특히 손바닥) 등에는 DNase, RNase가 존재하므로 실험을 할 때
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유전자를 발현할 경우, insulin 단백질을 생산하게 된다. 따라서 이 세포가 생산해내는 단백질을 조사하게 되면 유전자의 도입 여부를 가늠할 수 있다.
ii) 생산된 단백질을 western blotting을 통해 확인하면 insulin 단백질을 확인할 수 있다.
iii) 직
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Plasmid perp한 것과 동일한 위치의 Band를 보여 주고있다.
③ pBulescriptⅡ SKⅡ+에 Corynebacterium의 2905라는 Gene이 Cloning된 Plasmid prep한 EcoRⅤ Cut
Marker를 기준으로 오른쪽 4개의 Band는 pBLUE에 Gene 2905를 Transformation하여 Plasmid prep한 것으로 이 DNA를 EcoRⅤ 절
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중화시켜 tube안의 solution이 PH7의 중성상태로 만들어 준다.(Neutralization)
참고문헌 및 출처
gene cloning and DNA analysis
http://www.genehunters.co.kr/Training/01_3_3.htm 원형 DNA인 plasmid DNA
서론
재료 및 방법
결과
토론 및 고찰
참고문헌 및 출처
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plasmid가 들어갔는지 확인한다. multiple cloning site는 여러 restriction enzyme이 자르는 장소이다. 따라서 원하는 gene을 알고 있는 장소에 넣을 수 있다. 먼저 ligation하기 전에 plasmid랑 삽입하고자 하는 gene을 모두 같은 restriction enzyme으로 처리해 주면,
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