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Agarose gel electrophoresis ＆ Gel elution
전기영동
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• 용액에 전류를 통했을 때 용액 중의 하전 입자가 양극 또는 음극으로 이동하는 현상
• 주로 단백질 관련 물질 또는 유사한
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elution을 통해 크기를 확인하고, 회수하였다. 실험결과, 650 bp 의 band가 나타났으며, DNA 농도는 약 1 ng/μl 이 나왔다. 이것은 다음실험인 ligation에는 조금 부족한 양임을 알 수 있고, ligation 확률도 떨어질 수 있음을 예상할 수 있다.
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Ⅰ. Chromatography
1.정의
각 시료 구성 성분이 이동상과 정지상의 분배차이에 의해 분리되는 방법
이동상은 관속에 고정되거나 판상에 고정
되어 있는 정지상을 통해 이동시sample
내의 혼합물을 분리시킨다.
1. 분류 와 Elution
①정지
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5분간 말리는데, 상층액을 버릴 때에 100% EtOH이 있기 때문에 엎고 나서 다시 바로 하면 안된다. 남은 pellet이 다치지 않으려면 그대로 엎어둔 상태에서 한참을 놔둔 뒤에 65도씨에서 5분간 더 말린다. D.W 15ul을 넣고 다시 65도씨에서 10분을 열처리
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broth with antibiotics
STE buffer
alkaline lysis buffer Ⅰ
alkaline lysis buffer Ⅱ
alkaline lysis buffer Ⅲ
3M sodium acetate
PCI solution
70% EtOH
100% EtOH
elution buffer
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Elution 시켜주기 위해 0.2 M의 NaCl 등 eluant buffer를 5bed volumes으로 흘려준다. 마지막으로 재활용하기 위하여 1M NaCl buffer로 regeneration 시켜준다.
5.Crystallization
Chromatography 통하여 target 물질인 α-Amylase를 추출하였는데 이를 Crystallization 과정을 통하
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