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blotting
Western blotting(Immunoblottting)은 specific antiody를 이용하여 단백질 혼합물 중에서 원하는 단백질(antigen)만을 찾아내는 방법이다. 실험 방법으로 DNA에서 Southern blotting, RNA에서 Northern blotting과 같이 protein을 전기영동으로 분리시켜 놓고 이를 Nitr
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3차 구조를 완전히 깨서 1차 구조로 만든 다음에 시행하기 때문에 단백질 고유의 기능을 연구하는 데에는 많은 문제가 있다. 그래서 이러한 native gel을 사용한다. 여기에는 SDS는 들어가지 않으며, 이 방법을 쓸 때 중요한 것은 이온의 농도, 겔
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전에 부분적으로 가수분해 시킨다. 즉 DNA를 약산에 노출시키게 되면 부분적으로 depurination 현상이 일어나게 되며 다시 염기에 노출시키면 변성된 곳의 phosphodiester bond의 DNA골격이 결 과 예 측
Southern blotting 응용의 예
실험과정의 유의점
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Blotting
5) Phage typing
6) Fatty acid profiles
7) Flow cytometry (유세포 분석기)
8) DNA base composition
9) DNA fingerprinting
10) The polymerase chain reaction (PCR)
11) Nucleic acid hybridization
-Southern blotting
-DNA Chips
-Ribotyping and Ribosomal
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Southern의 목적
Southern blot analysis를 이용하여 특정 DNA가 한 생물체로 transformation되었는지 확인한다.
Probe를 사용 할 때는 이미 서열을 알고 있는 DNA의 complementary sequence를 이용한다.
이번 실험에서는 T-DNA가 다른 genome에 삽입 되었는지와 몇 copy
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asmid가 가진 항생제 내성을 가질 수 있다. 따라서 항생제 배지에서 키움으로 써 plasmid가 숙주에 잘 들어갔는지 확인할 수 있다. 우리 실험에서 pGEM-T easy vector는 ampicillin에 내성이 있기 때문에 LB agar 배지에 ampicillin을 깔고 conformation된 E. coli들을
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