식품분석(강의-09)-4

목차

제 3 장 유지의 화학적 시험법(336page)

3-1. 산가
3-2. 검화가
3-3. 요오드가
3-6. 과산화물가
3-7. TBA(thiobarbituric acid)가 측정


【 실 험】유지의 산가(Acid value) 및 과산화물가(Peroxide value) 측정

1. 산가
　1) 원 리
　2) 시 약
　3) 조 작
　4) 계 산
　5) 실험재료

2. 과산화물가
　1) 원 리
　2) 시 약
　3) 조 작
　4) 계 산
　5) 실험재료

3. 요오드가
　1) 원 리
　2) 시 약
　3) 조 작
　4) 계 산
　5) 실험재료


제 6 부

제 2 장 당질의 정량(p385)

제 8 부 비타민의 분석 (493Page)

제 1 장 Vitamin A 정량

1-1. SbCl3 법
1-4. β-Carotene(provitamin A)의 분리와 비색정량

제 2 장 Vitamin B1 정량

2-1. Thiochrome 형광법

제 3 장 Vitamin B2 정량

3-1. Lumiflavin 형광법

제 5 장 Vitamin C 정량


【 실 험】2,4-Dinitropheneylhydrazine[DNP(H)법]법에 의한 비타민 C정량

　1) 원 리
　2) 시약
　3) 검량선 작성
　4) 실험 방법
　5) 계 산

본문내용

을 흡착시켜 수세하여 vitamin B1 이외의 형광 물질을 제거시킨 다음, B1을 KCl-HCl용액으로 용출하며, alkali성에서 페리시안화칼륨(적혈염) 또는 bromocyan에 의해 vitamin B1을 산화시켜 청색의 thiochrome으로 바꾸며, 이것을 butanol에 이동시켜 자외선을 조사하여 발생하는 형광의 세기에 의해 vitamin B1을 측정한다.
Pyrophosphate(cocarboxylase)와 같은 결합형의 vitamin B1은 diastase속의 phosphatase에 의해서 vitamin B1을 유리시켜서 총 vitamin B1을 먼저 정량하고 diastase로 처리하지 않은 경우와의 차로써 결합형 vitamin B1의 함량을 구할 수 있다.
제 3 장 Vitamin B2 정량
Vitamin B2는 riboflavin이라고도 하는 황색 결정으로 수용액은 노랑색이고 특유한 황색광색을 낸다. 동식물체내에서는 flavin mononucleotide(FMN), flavin adenin-dinucleotide(FAD)와 같이 ether를 이루어 존재하는 경우가 많다.
3-1. Lumiflavin 형광법
Vitamin B2는 alkali성에서 빛을 쬐면 광분해하여 lumiflavin으로 변한다. 이 lumiflavin은 약산성에서 자외선을 쬐면 황록색의 형광을 내므로 형광광도계로 이 형광의 세기를 측정하여 vitamin B2를 정량할 수 있다. 식품 중의 vitamin B2는 B1과 같은 방법으로 추출하면 된다. 그러므로 B1을 정량하기 위해서 만든 추출액의 일부를 B2정량에 이용할 수 있다.
제 5 장 Vitamin C 정량
식품 중의 vitamin C에는 환원형인 L-ascorbic acid와 산화형 dehydroascorbic acid의 두 종류가 있으며, vitamin C 정량법은 indophenol 적정법, hydrazine 비색법 등이 있다. Ascorbic acid는 환원력이 세고 산성용액 중에서 홍색색소인 2,6-dichlorophenol indophenol을 환원해서 무색으로 변화시킨다.
Indophenol 적정법은 농도를 알지 못하는 ascorbic acid액에 indophenol을 적정해서 ascorbic acid를 정량할 수 있고,
Hydrozine비색법은 산화형인 dehydroascorbic acid에 2,4-dinitrophenylhydrazine(DNP)을 작용시키면 정량적으로 생성하는 적색의 osazone을 85% 황산용액에 녹여서 540㎚에서 흡광도를 측정하여 vitamin C의 함량을 구하는 방법이다. 이 정량법은 indophenol 적정법보다 미량의 vitamin C를 정량할 수 있고 SH기를 갖는 환원성 물질에 영향을 받지 않는 장점이 있으나 2,3-diketogulonic acid가 osazone을 생성하므로 이것이 많은 시료에는 부적합하다.
【 실 험】2,4-Dinitropheneylhydrazine[DNP(H)법]법에 의한 비타민 C정량
1) 원 리
산화형 비타민 C(Dehydroascorbic acid)에 2,4-dinitropheneylhydrazine(DNPH)을 작용시켜 적색의 osazone을 형성시키면 이 osazone의 양은 산화형 비타민 C에 비례하므로 이 osazone을 황산에 용해시켜 비색정량하는 방법이다. 즉 시료 중의 환원형 비타민 C를 산화시켜 산화형 비타민 C로 하고, 이것을 시료 중에 처음부터 함유된 산화형 비타민 C와 합쳐서 위의 반응을 이용하여 총 비타민 C 함량을 구한다. 환원형 비타민 C의 함량도 총 비타민 C와 처음부터 함유된 산화형 비타민 C와 차로부터 산출한다.
2) 시약
① 5% HPO3 ( 35% meta-phosphosphoric 142.857g / 1000ml )
② HPO3 - thiourea ……… 매회 제조
⇒ 10% HPO3 50ml + thiourea 2g → 100ml Fill up (증류수)
→ 35% meta-phosphosphoric 14.286g/50ml
③ 85% H2SO4
⇒ 물 : H2SO4 = 1 : 9 (※ 물에 황산을 천천히 부을 것)
④ DNP Soln ……… 2주 사용 可, 냉소 보관
⇒ DNP 2g + 9N H2SO4 → 100ml Fill up (9N H2SO4)
M.W(98)
×
1
×
100
= 28.03ml/l × 9N → 252.27ml/l
2
1.84
95%
⑤ 0.1% Dichloroindophenol ……… 2주 사용 可, 냉암소 보관
⇒ Dichloroindophenol 0.02g + 온수(50～60℃) 20ml → 여과
3) 검량선 작성
① 비타민 C 표준용액 제조 : Ascorbic acid 0, 3, 6, 9, 12, 15mg / 5% HPO3 100ml 제조
② 아래와 동일한 실험 조작
4) 실험 방법
① 시료의 Vit C 추출
- 사과주스(10ml/5%HPO3 100ml)
- 오렌지주스(10ml/5%HPO3 100ml)
<참고> 고체 시료 2.5g + 5% HPO3 40ml → Homogenizer(10000rpm, 3分) → Filter
→ 50ml Fill up (5% HPO3)
Blank test
총 Vit. C
산화형 Vit. C
Sample 2ml
Sample 2ml
증류수 2ml
↓
↓
② 산화 ⇒
0.1% Dichloroindophenol
(적색확인)
-
3 drop
3 drop
진탕후
1min 방치
↓
↓
↓
HPO3 - thiourea
2ml
↓
↓
↓
③ Osazone의 생성 ⇒
DNP Soln.
1ml
1ml
-
↓
↓
↓
방치
50℃, 1hr
↓
↓
↓
④ Osazone의 용해 ⇒
85% H2SO4
(2～3분간 서서히)
5ml
5ml
5ml
강하게 진탕
↓
↓
↓
DNP Soln 1ml
↓
방치
실온, 30min
↓
↓
↓
⑤ 비색 ⇒
흡광도
540nm 측정
5) 계 산
Vit C 함량 (mg%) =
(V1-V0)×D
×100
S
V0 : 공시험의 O.D값을 회귀식에 대입한 값
V1 : 본시험의 O.D값을 회귀식에 대입한 값
D : 희석배수

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식품분석,   강의,   화학적 시험법,   비타민,   당질,   산가,   과산화물가,   유지