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크로마토그래피법 (Gas Chromatography)
- 이 법은 기체시료 또는 기화(氣化)한 액체나 고체시료를 운반가스(Carrier Gas)에 의하여 분리, 관내에 전개시켜 기체상태에서 분리되는 각 성분을 크로마토그래피 적으로 분석하는 방법으로 일반적으로 무기
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전개할 Watman paper를 하단으로부터 1.5 ㎝ 지점에 연필로 선을 그어 놓는다
② 막자사발에 신선한 잎자루와 잎맥을 제거한 식물의 잎 10 g을 넣고 갈면서 acetone 40 ㎖을 2∼3회에 나누어 넣고 녹색추출물이 나올 때까지 간다
③ 준비된 paper의 하단
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큰 반점이 나왔을 수도 있을 것이다. 또한, 합성한 아스피린의 반점 색이 보라색이 나왔다는 점으로 미루어볼 때, 저번의 아스피린 합성 실험이 실패한 실험이라는 점을 알 수 있었다.
첫 번째 TLC판과 두 번째 TLC판의 페놀프탈레인 시료의 R값
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의 10배인 5ml의 양으로 wash를 해주어야 하는데, 한번에 5ml를 쓰는 것이 아니라 1ml씩 총 5번을 wash해준다. wash를 해줄 때에는 bead와 buffer가 다 뒤집힐 정도로 수직으로 강하게 분사한다. 강하게 분사하면 tip에 용액이 묻을 수가 있으므로 파이펫
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5,000
2,3-Butanedione
800,000
1-Iodobutane
1,500,000
n-Butanol
17
Chloroform
1,000,000
Chlorobenzene
1,200
CCl4
6,600,000
사용시 주의 사항 : 고순도(99.9995%)의 운반 가스를 사용하여야 한다. 만약 수분이나 산소 등의 오염물이 함유되어 있는 경우에는 감도나 직선성 범위
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원하는 밴드 외에 나타난 다른 단백질의 밴드를 없애기 위해 바꿔줘야 할 condition은 무엇일까?
Q2) Affinity chromatography 중에서
Ni-NTA vs. GST(glutathione S-transferase) →elution 원리의 차이
Q3) SDS-PAGE에서 APS, TEMED, sampling buffer조성
5.Reference
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에 각각 일차원 페이퍼크로마토그래피를 행하거나, 또는 2차원 페이퍼크로마토그래피를 행하여 완전히 분리시킬 수 있다.
Ⅳ. 생물체생체내 아미노산분리 실험결과
1. 알라닌
- 아미노산의 이동거리 : 66mm
- 아미노산의 반전색깔 : 자색
2. 발린
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통해 전기적 신호로써 나타내주는 장치로, 현재 주로 사용되고 있는 GC용 검출기는 다음과 같다.
* 열전도도 검출기(TCD ; Thermal Conductivity Detector) - 운반기체 : He, H2
* 불꽃 이온화 검출기(FID ; Flame Ionization Detector) - 운반기체 : N2, H2
* 전자포착 검
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감도가 높고(~10-13g/s), 선형 감응범위가 넓으며(~107g), 잡음이 적다. 또 고장이 별로 없고, 사용하기 편하다.
* 단점 : 시료를 파괴한다.
시약 및 기구
에탄올, 아세톤, 미지시료(에탄올 + THF 혼합물), syringe, Vial(4개), Kimswipes, GC
실험 방법
**실험하
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프로테인 A, 프로테인 G, 글루타티온-S-전이효소(GST), His6 등이 있다.
■사용법
: 이들 융합단백질은 친화 크로마토그래피(affinity chromatography)를 이용하여 분리할 수 있다. 목적 단백질의 N-말단에 GST를 결합시킨 경우 GST의 기질인 글루타치온 고
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