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ligation을 마친 DNA나, circular 형태의 Plasmid를 증폭하기 위해서, 혹은 cloning을 끝내고 완성된 vector가 있는데 그것을 expression하기 위해서 E.coli에 transformation을 해야 합니다. 이때 사용하는 E.coli host cell을 competent cell이라고 부릅니다.
① competent cell
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ligation 및 transformation하는 과정이었다. 지난 시간에 결과로 나왔던 PCR product를 insert로 넣었기 때문에 조마다 양을 다르게 하여 ligate를 만들었다. 우리조의 insert 농도는 7.88 ng/ul 이었는데, insert size와 vector size의 관계를 비교해서 적정한 insert 양
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다. 이 과정 역시 세게 흔들면 안 되는데 chromosomal DNA가 나오게 되면 앞으로의 과정에서 플라스미드와 따로 분리해 낼 방법이 없기 때문이다. buffer3를 넣어 pH를 7로 복구가 되면 크기가 작고 supercoiled form을 유지하고 있던 플라스미드는 비교적
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and method
Ligation test
Competent E. coli 제조
Transformation
Result and discussion
참고문헌
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사전)
핸드 아웃, 생물 실험, colony over-expression(5월 4째주 실험 예정)
http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_molecular/gene_cloning_18.htm 1.Introduction
(1) ligation
(2)Transformation of E. coli
2.Material
3.Methods
⑴ Ligation
⑵ Transformation
4.Result
5.Discussion
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