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전기영동은 통상 1차원적으로 등전점 전기영동(Iso Electric Focusing: IEF)을 하고, 단백질을 등전점으로 분리해서 다시 2차원적으로 SDS-전기영동(SDS-PAGE)으로 등전점이 같은 단백질을 분자량을 기준으로 분리하는 방법이다. 이 방법은 최초 O’Farell1
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SDS-PAGE 이미지)
<http://www.motifolio.com/6111177.html>
2) Seed-Proteome (2차 전기영동 이미지)
<http://www.seed-proteome.com/index.php?rub=_2D_electrophoresis>
3) Nerocard (원심분리이미지)
<http://www.neurocard.net/flat.php?stack=279>
4) Oregon State University (크로마토그래
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않아서 Stacking gel부분에서 성공적으로 나열되지 않고 protein이 뭉쳐서 Separating gel부분에서 다른 Sample과는 달리 늦게 내려가는 결과가 나온 것이다. 실험 제목 : Protein Purification, Electrophoresis(SDS-PAGE)
실험 목적
실험 과정
실험 결과
고찰
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전기영동 방법은 단백질들을 denaturation시켜 단백질의 분자량에 의하여 이동 속도를 달리하여 분리시키는 SDS-PAGE(polyacrylamide gel electrophoresis)이며, 이는 또한 발견자의 이름을 따서 Laemmli's gel이라고도 한다.
SDS-PAGE는 단백질 고유의 aggregation을
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전기장을 이용하면 분자량에 따라 gel의 분자 걸름 효과와 전하의 효과에 의해 gel상에 분리된다. 작은 분자량 일수록 빨리 이동하기 때문에 분자량 marker와 비교함으로써 분자량의 추정이 가능해진다. SDS-PAGE는 분리능이 우수하여 western blot 또
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전기영동을 이용하여 단백질과 DNA의 크기를 측정하는 네 번째 실험에서 α-synuclein의 크기는 38.619kd, LDH의 크기는 22.039kd였고 DNA중 하나는 초나선구조, 하나는 선형구조를 갖는다.
먼저 단백질은 SDS-PAGE를 이용하여 크기를 구했는데 SDS는 계면
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경우 효소에 의해 다시 잘려, agarose gel로 전기영동 하였을 때 vector와 insert, 이렇게 2 band로 나오는 것을 이용한 것이다.
DNA
10㎕
10×H buffer
2㎕
NdeⅠ
1㎕
XhoⅠ
1㎕
DDW
6㎕
total
20㎕
다시 PCR로 확인해 보았다.
premix에 다음과 같이 넣고 PCR을 했다.
DNA
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ote인지, homozygote인지를 구별 할 수 있었다.
실험이 성공적으로 이루어져 깔끔한 상태의 결과를 확인할 수 있었고, 어떤 것이 자식 오염주인지 전기영동 결과를 통해 알 수 있었다. 한 개의 종자(4번)만이 대립되는 두 allele을 갖지 못하여, 1개의
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