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차 구조를 완전히 깨서 1차 구조로 만든 다음에 시행하기 때문에 단백질 고유의 기능을 연구하는 데에는 많은 문제가 있다. 그래서 이러한 native gel을 사용한다. 여기에는 SDS는 들어가지 않으며, 이 방법을 쓸 때 중요한 것은 이온의 농도, 겔과
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Blot에서 좋은 결과를 얻기 위해서는 가장 조심해야 할 것이 RNase의 오염을 방지하는 것이다. RNase는 실험하는 사람의 손에도 많기 때문에 절대 맨손으로 다루어서는 안되고, 기구나 시약 모두 RNase free하게 만든 후 사용해야 한다.
4.Western blot
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CREB(대장균 CREB)
동일한 위치(약 43kd)에서 띠 관찰
양 세포에서 상당히 많은량의 CREB 발현 의미
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Western blotting
Western blotting(Immunoblottting)은 specific antiody를 이용하여 단백질 혼합물 중에서 원하는 단백질(antigen)만을 찾아내는 방법이다. 실험 방법으로 DNA에서 Southern blotting, RNA에서 Northern blotting과 같이 protein을 전기영동으로 분리시켜 놓고 이
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Northern분석(P165), RT-PCR(P169), Western blotting(P172),Tag결합단백질(P177)
• DNA 전기영동, 단백질 전기영동
• 재조합단백질정제: polyhistidine-Ni2+ NTA 정제
세포증식
• 배양세포의 분열로 세포의 수가 늘어나는 것
• 배양세포의
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electronic array로 나눌 수 있다. #Cell culture
#동결보존(Cryopreservation)
#ELISA(Enzyme linked Immunosorbant Assay)
#Agarose gel Electrophoresis
#SDS Page
#Western Blotting
#Northen Blotting
#PCR(polymerase chain reaction)
#RT(reverse transcription)-PCR
#DNA Chip
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쌍으로 묶인 가닥만이 여전히 혼성화를 유지할 것이다. Macromolecule blotting and probing
Southern blotting
Method
Result
Northern blotting
Western blotting
Indirect ELISA:
Competitive ELISA
Arrays
DNA microarray
The basic microarray
Principle
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northern blotting
RNA를 paper에 고정 + 특이한 DNA(or RNA)를 탐침으로 사용
* western blotting
단백질을 paper에 고정 + 특이한 항체를 탐침으로 사용
6. 중합효소 사슬반응(polymerase chain reaction, PCR)
* DNA를 클로닝하지 않고 증폭시키는 방법
* 1984년 Karry Mullis
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웨스턴 브로트(Western blot), 노든슨 브로트(Northern blot), RT-PCR 등의 기술을 이용하여 티로시나제 합성수준에 대한 효능을 분석해 새로운 미백물질을 개발하고 있다.1990년대 들어서 세계적으로 고기능성 제품에 대한 소비자의 관심이 높아짐에 따
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유해성에 대해 항상 숙지하고 조심스럽게 다룬다. 1. Northern Blot의 원리
2. Northern Blot Protocol
1) Gel 만드는 법
2) 전기 영동(Agarose)
3) Northern Blot (Capillary transfer)
4) Prehybridization/ Hybridization
3. 동위 원소 실험실 내에서의 안전 수칙
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