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프로테인 A, 프로테인 G, 글루타티온-S-전이효소(GST), His6 등이 있다.
■사용법
: 이들 융합단백질은 친화 크로마토그래피(affinity chromatography)를 이용하여 분리할 수 있다. 목적 단백질의 N-말단에 GST를 결합시킨 경우 GST의 기질인 글루타치온 고
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affinity 가없는 Protein 이고 E 의 경우 Ni 과 affinity 가 있는 즉 PDI 라 보면 된다. E에서 PDI 값은 약 45kDa 보다 상위에 있는 값이 나왔으며 자료상 509 aa (55.99 kDa) 대략 비슷한 값이 나옴을 알 수 있다.
Ⅳ 토 의
O.D 값이 1을 넘으면 신뢰성이 떨어지는
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otein을 제거하기 위한 washing buffer에 target protein이 딸려 내려온 것은 20 mM imidazole concentration이 우리가 넣은 6X-His tagged protein을 washing하는데 약간 높은 농도임을 알 수 있다(선행실험과 비교하였을 때 resuspension이 잘 이루어지지 않아 affinity chromato
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원하는 밴드 외에 나타난 다른 단백질의 밴드를 없애기 위해 바꿔줘야 할 condition은 무엇일까?
Q2) Affinity chromatography 중에서
Ni-NTA vs. GST(glutathione S-transferase) →elution 원리의 차이
Q3) SDS-PAGE에서 APS, TEMED, sampling buffer조성
5.Reference
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affinity를 낮추어 결합을
끊어준다. 이 과정이 실질적으로 fibronectin을 분리해내는 과정이다.
여섯 번째, 8M의 Urea와 e.q buffer를 column에 넣어 resin에 결합한 모든 protein을 끊어 제거한 후, column을 washing한다.
전반적인 실험이 빠르게 진행되어 미리
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affinity transport of nickel ions. J. Biol.Chem. 273, 235-241.
12. Garner, R.M., Fullkerson Jr., J., Mobley, H.L., 1998. Helicobacter pylori glutmine synthetase lacks features associated with transcriptional and posttranslational regulation. Infect. Immun. 66, 1839-1847.
13. Harry, L.T. Mobley, Geor
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affinity를 비교하는 연구에 참여하여 실험하였습니다.
더불어 연구 과정에 필요한 추가 실습을 위해 대전 IBS에 방문하여 Cryo-EM에 활용될 시편 제작 실습을 수료하였습니다. 실습 후 교수님의 권유에 따라 스스로 CryoSPARC을 학습한 뒤에 해당 프
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