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eting 실수로 DNA 샘플을 흘림
▲ 참고자료
http://www.kjcp.co.kr/note/lecture%20note/basic-exp/basic-note/Chapter%205%20%
20Instrumental%20handling.htm
Molecular Biology(分子生物學 / David Freifelder / 아카데미서적 / p.91 실험제목
실험목적
결 과
토의내용
참고자
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1.Abstract
2.Introduction
1)DNA
2)Escherichia.coli(E.coli)
3)분광광도계
4)흡광도
5)Cell lysis (CW, CM파괴)
6)EDTA
7)Dnase
3.Meterials & Methods
4.Results
5.Discussion
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지고 이후 DNA는 완전히 분리된 상태로 존재하게 된다. 보통 260nm에서의 흡광도 증가가 최대값의 1/2에 도달했을 때의 변성온도를 DNA의 융해온도라 한다. DNA의 Tm은 생물종에 따라 다르고 G-C 함량이 많으면 Tm이 높게 나타나므로 Tm을 측정하면 G-C
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실험 목적
2. 실험 이론
1) DNA
2) Genomic DNA
3) DNA 추출
4) 분광광도계
5) 흡광도 측정을 이용한 순도 측정의 원리
3. 시약 및 실험기구
4. 실험 방법
5. 참고사항
6. 참고문헌
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맞춰준다. 측정하고자 하는 DNA를 증류수의 100배 희석해서 260nm에서 흡광도를 측정한다. spec size가 150일 경우O.D 측정 (Spectrophotometer) => DNA 1λ를 149λ의 ddH2O에 희석하여 측정한다. 260nm에서 1이면 50㎍/ml, {O.D 260nm} over {O.D 280nm} =1.8이면 pure DNA로
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DNA가 Denaturation 과 Hybridization을 겪으면서 완벽한 본래의 supercoiled form으로 복구가 되지 않기 때문에, 실험결과상 Band가 다르게 보일지라도 결과적으로는 colony에서도 같은 pGEX6P-1이 발현 되었음을 알수 있다.
흡광도는 빛이 어떠한 매체를 통과
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DNA를 구성하는 네 가지 염기의 구조와 특성을 이해하고 DNA의 정량 방법과 순도결정 방법을 실험한다
3. 실험원리
★ Bradford Assay
원 리
- Coomassie Brilliant Blue G-250 (CBBG) 가 arg, trp, tyr, his, phr 에 결합시 흡광도의 변화를 측정한다
- dye는 6개의
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DNA를 분리하고자 할 경우에는 추출한 DNA 용액을 4 의 50mM Tris-Cl, pH8.0, 10mM EDTA 용액에서 투석을 실시한다. 투석된 50mM Tris-Cl, pH8.0, 10mM EDTA 용 액의 흡광도가 270㎚에서 0.05㎚이하가 될 때까지 계속한 후 pH8.0인 TE buffer 용액에서 4시간 이상 투석한
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DNA의 base들의 고리구조와 역시 고리구조를 가지고 있는 sugar backbone이 특정 광선에 대한 흡광력이 있다는 것을 이용한 방법이다.
DNA는 260nm 파장에서 최고의 흡광도를 보이며, 1 A260 Unit가 ds-DNA는 50ug/ ml, ss-DNA는 33ug/ul, ss-RNA는 40ug/ml, oligomer는 25
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DNA 용액을 100배 희석하여 0.1ml를 준비한다.
ⅲ) 희석한 DNA 용액을 수정 cuvette에 옮기고 260nm에서의 흡광도 및 280nm에서의 흡광도를 각각 측정한다. 260nm에서의 흡광도 값이 0.01-0.1 사이면 적당하다.
ⅳ) OD 값으로부터 DNA 농도를 계산한다.
* 260nm에
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