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많이 쓰고 있다.
Phosphorylation은 serine을 포함한 hydroxyl기에 negative 인산기를 추가된다.
cytoplasmic proteins의 3분의 1가량은 인산과 공유 결합한다.
인산화가 되는 부위들은 단백질의 활동은 조절할 수가 있다.
예를 들어 인산화가 되는 부위들은
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gel 부분만 extract 하고 pGEMTE는 extract 하지 않았다.
이번실험에서 우리조(2조)는 첫번째 electrophoresis를 하는 도중, agarose gel 이 불량인 관계로 DNA가 Pipetting 도중 새어나갔기 때문에, extraction 실험은, 예비로 만든 DNA gel을 활용하기로 하였다.
따라
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extraction buffer 150ml를 세포 위에 뿌려주고 scraper로 긁어주어 화학적인 분해뿐만 아니라 물리적으로도 세포가 분쇄되도록 한다.
5. 이 세포 추출물들을 tube에 담아 centrifuge로 분리하여 상등액에 있는 단백질들을 추출.
(2) Gel 만들기 – 이
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Gel Electrophoresis
3.21.~28.
Enzyme digestion & Gel extraction
4.4.
Ligation & Transformation
4.18.
Agarose gel electrophoresis & Confirm the plasmid DNA
4.25. 1. Plasmid Mini prep & PCR & Agarose Gel Electrophoresis
3.21.~28.
2. Enzyme digestion & Gel extraction
4.4.
3. Ligation
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Gel Extraction kit를 이용하여 절편을 정제하였다. 다음으로 분리한 절편을 BamHⅠ과 XbaⅠ으로 잘라 ligation을 위한 insert를 만들었고, 다시 한번 전기영동과 elution을 통해 크기를 확인하고, 회수하였다. 실험결과, 650 bp 의 band가 나타났으며, DNA 농도
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